ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 A 組輪狀病毒（Rotavirus）表達。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人 A 組輪狀病毒（Rotavirus）表達。用純化的人 A 組輪
狀病毒（Rotavirus）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中 A 組輪狀病毒（Rotavirus）相
結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的 A 組輪狀病毒（Rotavirus）抗
體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測
定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人 A 組輪狀病毒（Rotavirus）的
存在與否。
試劑盒組成
1
30 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7
終止液
6ml×1 瓶
2
酶標試劑
6ml×1 瓶
8
陽性對照
0.5ml×1 瓶
3
酶標包被板
12 孔×8 條
9
陰性對照
0.5ml×1 瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1 瓶
10
說明書
1 份
5
顯色劑 A 液
6ml×1 瓶
11
封板膜
2 張
6
顯色劑 B 液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
ELISA試劑盒操作步驟
1.
編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.
加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.
配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.
溫育：操作同 3。
8.
洗滌：操作同 5。
9.
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為 A 組輪狀病毒（Rotavirus）陰性
陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為 A 組輪狀病毒（Rotavirus）陽性
。
ELISA試劑盒注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月