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科研抗體: 一抗

生物試劑: 其他生化試劑表面活性劑碳水化合物類植物激素及核酸類抗生素類酶類

細(xì)胞株細(xì)胞系: 細(xì)胞

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大鼠磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）ELISA試劑盒*

時(shí)間：2013-6-6閱讀：285

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實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）水平。用純化的大鼠磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入磷酸化蛋白激酶C（P-PKC），再與HRP標(biāo)記的磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）濃度。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

大鼠磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）ELISA試劑盒*

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1瓶	8	標(biāo)準(zhǔn)品（200IU/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

100 IU/L	5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 IU/L	4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 IU/L	3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5 IU/L	2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6.25 IU/L	1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

大鼠磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）ELISA試劑盒*相關(guān)產(chǎn)品：

GATA-3（GATA binding factor 3）  GATA結(jié)合蛋白3抗原
GATA-4（GATA binding factor 4）  GATA結(jié)合蛋白4抗原
Gax（growth arrest-specific homeobox）  生長(zhǎng)終止特異性同源盒基因抗原
GDF8/MSTN（growth differntiation factor 8）  生長(zhǎng)分化因子8抗原
GDNF （Glial cell line-derived neurotrphic factor）  膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗原
Gelsolin  凝溶膠蛋白抗原
GFP （Green Fluorecent protein）  綠色熒光蛋白多肽抗原
GFP （Green Fluorecent protein）  綠色熒光蛋白
GITR （glucocorticoidinduced tumor necrosis factor receptor）  糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體抗原
GLI1（GLI-Kruppel family member 1）  下游轉(zhuǎn)錄因子Gli1蛋白抗原
GLP-1/KG-31（Glucagon-like peptide-1）  胰高血糖素樣肽-1抗原
GLUT3（Glucose transporter 3）  葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗原
GM-CSF（Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factors）  粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗原
GPA33（glycoprotein A33 transmembrane）  糖蛋白A33（跨膜）抗原
glypican 1  磷脂?；嫉鞍拙厶?1抗原
GPC3（glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7）  磷脂?；嫉鞍拙厶?3（多肽）
Glypican 4（Glypican proteoglycan 4）  磷脂?；嫉鞍拙厶?4抗原
UTS2R/GPR14（Urotensin II receptor：G Protein Coupled Receptor 14）  G蛋白偶聯(lián)受體14抗原
GPR30（G Protein Coupled Receptor 30）  G蛋白偶聯(lián)受體30抗原
KiSS-1R/GPR54/GPCR54（KiSS-1 receptor/G-Protein Coupled Receptor 54）  G蛋白偶聯(lián)受體54抗原
GRK2/BARK1 （G-protein coupled receptor kinase 2）  G蛋白偶合受體激酶2抗原
GRM2/GLUR2 （Glutamate Receptor Metabotropic 2）  促代謝型*受體2抗原
GROα/GRO/MGSA/CXCL1 protein （growthregulated oncogene α）  生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生zhang刺激因子α 抗原
GRP78（glucose regulated protein 78）  葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗原（熱休克蛋白70蛋白5）
GSK-3α （Glycogen Synthase Kinase-3 alpha）  葡萄糖合成激酶-3α抗原
phospho-GSK-3β（pSer9）   磷酸化葡萄糖合成激酶-3β抗原
GSR/GRase（glutathione reductase）  *還原酶抗原

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