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提高IHC方法敏感性的輔助手段

時(shí)間:2013-1-8閱讀:382
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1)蛋白酶消化蛋白酶消化可以去除覆蓋于抗原決定簇表面的雜蛋白,更為重要的是因甲醛固定而引起的交聯(lián)被打開,有利于抗原—抗體的結(jié)合,提高陽性檢測率。

(2)抗原修復(fù)選擇適宜的修復(fù)液(pH值、離子濃度)、修復(fù)方式、溫度。

(3)抗原修復(fù)與酶消化結(jié)合使用。

(4)高敏感顯色方法的選擇DAB是IHC染色中HRP常用的供氫體,如在其顯色液中加入一定量的金屬離子,例如Ni、Cu、Ag等,不但可提高其敏感性,還可以改變其終產(chǎn)物的顏色。TMB即四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽,是一種敏感性較高的顯色基團(tuán)。NBT/BCIP為堿性磷酸常用的顯色劑,其敏感性要遠(yuǎn)高于HRP的DNA顯色劑。另外,開展膜上雜交或蛋白檢測可用高敏感的化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)。

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