特異性背景條帶的產(chǎn)生是由于多克隆抗體血清中的雜抗體或是待測(cè)抗原和樣品中其他成分，具有可被抗體識(shí)別的共同表位而產(chǎn)生的特異性交叉反應(yīng)。后者在使用單克隆抗體時(shí)較普遍。非特異性擴(kuò)散的背景主要是由于印跡膜封閉得不適當(dāng)或者是檢測(cè)試劑和封閉緩沖液中的某一成分發(fā)生特異性反應(yīng)造成的。
（1）應(yīng)對(duì)背景彌散的策略
1）若用間接檢測(cè)技術(shù)，首先應(yīng)考慮二抗是否與背景有關(guān)。觀察省去一抗時(shí)二抗單獨(dú)作用所產(chǎn)生的背景。若背景由二抗產(chǎn)生的，可采用以下措施：①縮短二抗的孵育時(shí)間；②試用高濃度的蛋白質(zhì)來(lái)吸附二抗。首先在二抗試劑內(nèi)加入3％BSA。若背景仍然存在，再試用抗原制品的原液（用丙酮臟粉較好）；③使用替代的二抗。
2）使用不同的封閉緩沖液。
3）若無(wú)別的選擇，可嘗試用5％脫脂奶粉／吐溫。
4）滴定一抗和／或二抗的效價(jià)，找到一個(gè)產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度可以接受的較低濃度。
5）縮短一抗和二抗的孵育時(shí)間。
6）每一步都用RIPA緩沖液（1％NP40、0．5％DOC、0．1％SDS、150mmol／L NaC1和50mmol／LTris，pH8．0）沖洗印跡膜。
7）在一抗和二抗試劑中加入1％NP-40或0．3％吐溫和3％BSA。
8）延長(zhǎng)每次清洗時(shí)間。
（2）應(yīng)對(duì)特異性背景條帶的策略
1）若用間接檢測(cè)技術(shù)，首先應(yīng)考慮二抗是否與背景有關(guān)。觀察省去一抗時(shí)二抗單獨(dú)作用所產(chǎn)生的背景。若背景條帶是由二抗產(chǎn)生的，首先使用替代的標(biāo)記試劑。其次，試用抗原制品原液吸附二抗。丙酮粉較為適合。
2）若使用單抗，可改用另一種單抗。但必須注意，若同一條帶持續(xù)存在，說(shuō)明待測(cè)抗原和其他條帶之間存在氨基酸的同源性。
3）若使用多克隆抗血清作為一抗，可試用不含待測(cè)抗原的蛋白質(zhì)制品吸附血清。

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