免疫PCR體系的組成
免疫PCR體系由待檢抗原，特異性抗體，連接分子，DNA和PCR擴(kuò)增系統(tǒng)。以下為上海勁馬為大家提供的免疫PCR體系有哪些重要組成。咨詢。
1．待檢抗原  被檢測的樣品可以是抗原，或者是作為抗原的某種抗體。待檢的抗原可以直接吸附于固相(包被抗原)，這一過程與ELISA試驗(yàn)是相同的。
2．特異抗體  免疫PCR中的特異性是對應(yīng)于待測抗原，與ELISA一樣，抗體的特異性和親和力將影響免疫PCR的特異性和敏感性。一般均選用單克隆抗體，這個(gè)抗體常采用*標(biāo)記，通過親和或葉綠素再結(jié)合DNA。
3．連接分子  連接分子是連接特異抗體與DNA之間的分子。Sano等用鏈親和素/蛋白A(striptavidin-protein A)基因工程融合體作為連接分子來連接*標(biāo)記的DNA與抗體，此種融合蛋白的鏈親和素部分可識(shí)別DNA上的*，蛋白部分可識(shí)別抗體的Fc段。
4．DNA和PCR系統(tǒng)   免疫PCR中的DNA是一指示分子，用DNA聚合酶將結(jié)合于固相上的DNA特異放大，由此定量檢測抗原。免疫PCR的敏感性多于ELISA主要是應(yīng)用了PCR強(qiáng)大的擴(kuò)增能力。免疫PCR中的DNA分子可以選擇任何DNA，但要保證DNA的純度，且有較好的均質(zhì)性，盡可能不選用受檢樣品中可能存在的DNA。一般可選用質(zhì)粒DNA或PCR產(chǎn)物等。DNA的*化是用*標(biāo)記的dATP或dUTP通過聚合酶標(biāo)記在DNA分子上，一般是1個(gè)分子DNA標(biāo)記2個(gè)*，標(biāo)記率可達(dá)。免疫PCR的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)與一般PCR一樣，主要包括引物、緩沖液和耐熱DNA聚合酶。