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進口培養(yǎng)基: 顯色培養(yǎng)基大腸桿菌O157培養(yǎng)基細菌總數(shù)培養(yǎng)基 *培養(yǎng)基沙門氏菌志賀氏菌培養(yǎng)基弧菌檢驗培養(yǎng)基酵母霉菌青霉曲霉培養(yǎng)基其它培養(yǎng)基李斯特氏菌檢驗培養(yǎng)基藥品、生物制品檢驗培養(yǎng)基臨床檢驗培養(yǎng)基其它菌檢測培養(yǎng)基

抗體: 一抗二抗

食品檢測試劑盒: 進口檢測試劑盒進口檢測試紙條進口PCR檢測試劑盒 ELISA快速檢測試劑盒食品與農(nóng)產(chǎn)品安全速測試劑盒其他檢測試劑盒

放免試劑盒: 進口甲狀腺進口腫瘤進口糖尿病進口心血管進口性腺進口細胞因子其它試劑盒進口酶聯(lián)免疫試劑盒

免疫化學(xué)產(chǎn)品: 免疫球蛋白抗原純化抗體熒光素標(biāo)記抗體酶標(biāo)記抗體酶標(biāo)親合素及*化抗體免疫血清

其它方法測試盒: 速率法測試盒終點法測試盒比色法測試盒染液測試盒其他測試盒

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雞腫瘤壞死因子ELISA試劑盒說明書

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上海勁馬實驗設(shè)備有限公司
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雞腫瘤壞死因子ELISA試劑盒試驗原理：

TNF-A試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知TNF-A濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將TNF-A和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-A的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制：

試劑盒成份	96孔配置	48孔配置
96/48人份酶標(biāo)板	1塊板（96T）	半塊板（48T）
塑料膜板蓋	1塊	半塊
標(biāo)準(zhǔn)品:400pg/ml	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
空白對照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
*標(biāo)記的抗TNF-A抗體	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP	1瓶（12ml）	1瓶（5ml）
洗滌緩沖液	1瓶（20ml）	1瓶（10ml）
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
終止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）

自備材料：

1. 蒸餾水。

2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

雞腫瘤壞死因子ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1、血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

雞腫瘤壞死因子ELISA試劑盒操作注意事項：

● 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

● 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

● 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

● 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

● 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

● 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

● 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

安全性：

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2. 實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

試劑的準(zhǔn)備：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

400 pg/ml	（6號標(biāo)準(zhǔn)品）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
200 pg/ml	（5號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml	（4號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml	（3號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml	（2號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5 pg/ml	（1號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml	（空白對照）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

2. 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

試劑盒性能：

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

雞腫瘤壞死因子ELISA試劑盒操作步驟：

1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

8. 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié) 果判斷與分析：

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的TNF-A標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的TNF-A含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

3、檢測值范圍： 0-400pg/ml

4、敏感度：1.0pg/ml

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