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別名:兩性電解質(zhì)載體;Ampholyte solution; Ampholime
性狀:近無(wú)色至淺黃色透明液體。有粘性。為一種相對(duì)分子質(zhì)量小于1000的,人工合成的多氨基多羧酸系列兩性化合物的復(fù)雜混合物。實(shí)際含量為40%的溶液,
用途:用于生物大分子蛋白胨和酶的等電聚焦電泳。
原理:它在大于其等電點(diǎn)的pH環(huán)境中解離成帶負(fù)電荷的陰離子,向電場(chǎng)的正極泳動(dòng),在小于其等電點(diǎn)的pH環(huán)境中解離成帶正由荷的陽(yáng)離子,向電場(chǎng)的負(fù)極泳動(dòng)。這種泳動(dòng)只有在等于其等電點(diǎn)的pH環(huán)境中,即蛋白質(zhì)所帶的凈電荷為零時(shí)才能停止。
*條件:
1.可溶性要好,為了保證等電聚焦過(guò)程中PH梯度的形成和蛋白樣品的遷移,載體必須具有很好的溶解性能。
2.紫外吸收低,不發(fā)熒光。由于制備分離時(shí),檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法通常是測(cè)量280cm的吸光度,因此要求載體在280cm的吸光度盡可能低。
3.在等電點(diǎn)處必需有足夠的緩沖能力,以便能控制pH梯度,而不致被樣品蛋白質(zhì)或其他兩性物質(zhì)的緩沖能力改變pH梯度的進(jìn)程。
4.在等電點(diǎn)必需的足夠高電導(dǎo),以便使一定的電流通過(guò),而且要求具備不同pH值的載體有相同的電導(dǎo)系數(shù),使整個(gè)體系中的電導(dǎo)均勻,如果有局部電導(dǎo)過(guò)小,就會(huì)產(chǎn)生極大的電位降,從而其他部分電壓就會(huì)太小,以致不能保持梯度,也不能使應(yīng)聚焦的成分進(jìn)行電遷移,達(dá)到聚焦。
5.分子量要小,便于與被分離的高分子物質(zhì)用透析或凝膠過(guò)濾法分開(kāi)。
6.化學(xué)組成應(yīng)不同于被分離物質(zhì),不干擾測(cè)定。
7.無(wú)毒、無(wú)生物學(xué)效應(yīng)。載體對(duì)哺乳動(dòng)物的組織培養(yǎng),酶活性測(cè)定,免疫檢測(cè)或注射到小白鼠或大鼠中都沒(méi)有影響。
8.應(yīng)不與分離物質(zhì)反應(yīng)或使之變性??偲饋?lái)說(shuō),當(dāng)一個(gè)的等電點(diǎn)介于兩個(gè)很近的pk值之間時(shí),它在等電點(diǎn)的解離度大,緩沖能力強(qiáng),而且電導(dǎo)系數(shù)高,這 就是好的載體。
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