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氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)的定性鑒定操作方法

時(shí)間:2013/4/18閱讀:463
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氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)的定性鑒定操作方法:
將兔擊暈,迅速解剖,取出肝臟,在低溫條件下剪碎。稱取勻漿后,離心取上清液,即為制備的酶液。體外氨基移換反應(yīng)。紙上層析法檢查每人4個(gè)點(diǎn)(標(biāo)準(zhǔn)*溶液、標(biāo)準(zhǔn)*溶液、對(duì)照上清液、樣品上清液)。點(diǎn)樣放入層析罩內(nèi)。用被酚所飽和的水溶液,平衡后,用帶小漏斗的玻璃管從層析罩上加飽合酚試劑25ml于層析缸內(nèi)。然后,立即蓋緊塞子,當(dāng)溶劑前沿達(dá)到距濾紙上端約2.5cm處,取出濾紙,晾干或吹干,以除去酚溶劑,噴灑0.1%茚三酮乙醇溶液,放入烘箱中顯色氨基酸與茚三酮反應(yīng),在濾紙上呈現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)。

關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng)
① 取動(dòng)物新鮮組織制備酶液,防止酶失活。
② 加碘乙酸抑制酶解作用。

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