小鼠腫瘤壞死因子α ELISA試劑盒使用說(shuō)明

【產(chǎn)品用途】：被測(cè)樣品定性定量分析

【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T（兩種規(guī)格）

【檢測(cè)方法】：酶免法/酶聯(lián)免疫法（ELISA）

【保存條件】：2-8℃

【供 貨 期】：1-3天（現(xiàn)貨供應(yīng)）

【產(chǎn)品性狀】：液體盒裝

檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,保存條件:2-8℃,公司提供代測(cè)服務(wù)，。

檢測(cè)范圍：                                                          96T

3pg/ml-160pg/ml

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒組成

原理
本實(shí)驗(yàn)采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IFN-r與單抗結(jié)合，高靈敏檢測(cè)樣品中IFN-r的含量。 

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 洗滌液：用重蒸水1:25稀釋

2. 收集血液標(biāo)本：采集血清盡早檢測(cè)，2-8oC保存一天；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 oC）保存，避免反復(fù)凍融。

檢測(cè)程序

1. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋至第六孔，zui后，從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對(duì)照，第八孔為零孔。

2. 加樣：待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul混勻。

3. 將反應(yīng)板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。

4. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

5. 每孔（除零孔）加*抗體工作液50ul，置37℃ 60分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔（除零孔）加酶標(biāo)抗體工作液100ul（兩滴），將反應(yīng)板置37 oC 60分鐘。

8. 洗板：同前。

9. 每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反應(yīng)15分鐘。

10. 每孔加入1滴終止液混勻。

11. 在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1. 所有OD值都應(yīng)減除零孔值后再行計(jì)算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0 pg/ml之OD值在雙對(duì)數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)標(biāo)本的OD值可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度?；蚴褂糜?jì)算機(jī)軟件，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品含量。

注意事項(xiàng)

1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待查樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。有效期6個(gè)月。

3. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。

4. 本試劑盒含2M硫酸，不要將它與含*的廢物混在一起。

5. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

6. 本試劑盒僅供研究用。