EB的危害及其實驗室安全使用預(yù)防措施

時間：2011/9/8閱讀：2062

在電泳實驗或其他核酸分離實驗中，常用EB（Ethidium bromide，EtBr）作非放射性的Marker，來識別和顯示核酸條帶。EB是一種深紅色不易揮發(fā)的晶體，微溶于水。當(dāng)被紫外線照射時能發(fā)出紅褐色的熒光。盡管EB是一種的顯色劑，但它的高危險性要求特殊的安全管理和回收流程。

人體危害 EB是一種強誘變劑（可能造成遺傳性危害），直接接觸有中等毒性。EB可以通過皮膚吸收，因此應(yīng)當(dāng)避免一切與EB的直接接觸。EB對皮膚，眼睛，口腔和上呼吸道系統(tǒng)有刺激性作用。應(yīng)將EB安全密封，并密閉存放于干燥避光處。

安全預(yù)防措施 良好的操作習(xí)慣可以降低危害接觸。

在通風(fēng)廚使用粉狀或結(jié)晶EB時，或使用含EB的溶液或片劑時，為避免吸入EB，應(yīng)避免與EB的直接接觸。

為避免皮膚接觸到溶液中的EB，應(yīng)戴手套、實驗服和防護(hù)鏡，并勤換手套。

要告知ＥＢ使用者ＥＢ的危險性、正確使用及回收方法。此外，經(jīng)培訓(xùn)的才能通過實驗室化學(xué)衛(wèi)生管理計劃，獲得ＣＨＰ（the laboratory’s Chemical Hygiene Plan）的證書。擁有該證書者才算是按標(biāo)準(zhǔn)操作使用ＥＢ。

在使用含ＥＢ類材料前需制訂一份ＥＢ安全使用說明。

進(jìn)入工作區(qū)域需佩戴防護(hù)鏡并確認(rèn)有可使用的洗眼及淋浴設(shè)施。

和其他化學(xué)藥品一樣，在ＥＢ的使用及放置房間內(nèi)不準(zhǔn)飲食。

使用后脫去手套及時洗手，*處理掉殘留的ＥＢ。

在使用ＵＶ照射ＥＢ時，戴上紫外線防護(hù)鏡或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽。

緊急處理措施

誤入眼睛措施：如果ＥＢ不慎落入眼睛，立即用大量的冷水沖洗至少１５分鐘。能用洗*進(jìn)行擦洗。

誤接觸措施：如果皮膚不慎接觸到ＥＢ，立即脫去被污染的衣物。再用肥皂清洗接觸到的皮膚后，大量的冷水沖洗至少１５分鐘。

誤服措施：如果不慎誤服或吸入ＥＢ，將受害者移至通風(fēng)處，并及時送醫(yī)救治。

泄漏污染處理：如果EB不慎灑落在水槽或者下水道，請立刻告知相關(guān)管理部門。如果大量EB灑落，應(yīng)立即通知在該工作域的所有人員，將人員疏散并開始清理被污染的區(qū)域。在未清理好現(xiàn)場的同時，應(yīng)豎牌警告他人勿入。并為有關(guān)部門提供資料及協(xié)作。

若僅微量ＥＢ排入下水道并被及時發(fā)現(xiàn)，在確保安全的情況下可由實驗室熟知EB危害的人員進(jìn)行清理。當(dāng)然，清理EB的人員是必須經(jīng)過安全培訓(xùn)，并有防范意識和相應(yīng)的處理裝置。如果實驗室的人員未經(jīng)培訓(xùn)或沒有處理裝置，請相關(guān)部門進(jìn)行處理。

凈化處理：在清理微量灑落的ＥＢ時，需全程穿著*（按上文所描述的“安全預(yù)防措施”）。用紫外燈照射確定污染的位置。ＥＢ的熒光是很容易看到的。如果灑落的EB是粉末狀，用濕紙巾擦拭后并按程序清理。如果灑落的是液體，用干紙巾吸干后再用UV光檢查殘余的ＥＢ，然后按程序清理。

當(dāng)準(zhǔn)備或使用除污劑時配戴全面防護(hù)裝備（實驗服、手套和防護(hù)鏡）。在用ＥB前，需預(yù)先準(zhǔn)備好除污劑：4.2克*（NaNO2, CAS # 7362-00-0）和20毫升的次磷酸（50％）（H3PO2, CAS # 6303-21-5），加入300毫升水。

１）用紙巾蘸取去污劑擦洗被污染的區(qū)域，再用紙巾加自來水清洗5次，每次實用的紙巾都必須是干凈未污染的。

２）用紫外光檢查已清洗的區(qū)域，以確保所有ＥＢ被清除。必要時可重復(fù)步驟１。如果酸可能損害被污染的表面，可用適量自來水稀釋去污劑后再使用。

３）將所有使用過的紙巾用去污劑浸泡1小時，取出并將附著的去污劑擰干收回容器內(nèi)。被處理時使用的手套和其他物件可雙層包裹再扔棄。

４）在去污劑的容器上標(biāo)上EB去污劑，并注明成分。將去污使用過的物件打包，后續(xù)處理程序如下。

¹ Lunn, G. & Sansone, E.B., Destruction of Hazardous Chemicals in the Laboratory, John Wiley & Sons, New York, 1990, p. 119-120.

在下表中明確了各類含EB廢液的處理方法。從管道排放EB溶液前，先用紫外燈照射是否還有熒光。如果仍有熒光，那該溶液仍需處理后才能從管道中排放。

1）過濾，用木炭顆粒過濾器或ＥＢ回收器。類似處理的裝置有Schleicher & Schuell 的EB回收系統(tǒng)，以及EMD Biosciences的EB吸附器，這兩樣可在VWR公司購買到?；蚩蛇m用Fluka的EB/SYBR^®Green 清除劑，或Sigma的EB回收器，這兩個可在Sigma-Aldrich公司購買到。注意該產(chǎn)品的指示，不要超過回收器的能力。一旦超過它們的使用限度，過濾器或提取器必須經(jīng)生物安全處理后拋棄

2）吸收，現(xiàn)已有專門去除EB的“茶包”式產(chǎn)品，專門設(shè)計用于ＥＢ去污，如Qbiogene的GreenBag™ EB廢棄處理套件和Amresco的脫色袋。按照產(chǎn)品指示，確保有足夠的茶包吸收溶液中大量的ＥＢ。一旦已經(jīng)用盡，“茶包”必須經(jīng)相應(yīng)部門安全處理后拋棄。

拋棄處理 將實驗室處理廢棄EB的方法和程序記錄下來，并整合到實驗室的標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程序中。關(guān)于不同類型的EB物品的處理方法，請參閱下表。

　　　　　　　　　　　　　　　　廢棄ＥＢ處理指南

緩沖液ＥＢ濃度較低
（< 0.5mg/L）在排入下水道之前，緩沖液請先用過濾器或“茶包”處理。確定緩沖液中在紫外燈下無熒光方可下排。
儲備溶液，氯化銫溶液ＥＢ濃度較高
（ 1-10mg/mL）濃度之高，使得處理EB的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關(guān)部門專業(yè)人員處理。
處理用過的過濾器和“茶包” ＥＢ在（過濾/吸收過程）污染將已用的過濾器和茶包明確標(biāo)記。用過的過濾器和茶包交由相關(guān)部門處理。
凝膠ＥＢ濃度低
（ 3-5mg/L）先將凝膠晾干，裝入的袋子中做好標(biāo)記后，再交由相關(guān)部門處理。
污染的物件手套，清理灑落EB用過的材料，以及實驗室中污染ＥＢ的物品破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器，其他材料可擺放整齊后裝入袋中做好標(biāo)記，交由相關(guān)部門處理。
晶體及粉末含有較純或濃縮過的EB 交由相關(guān)部門處理。

廢液

描述

廢棄處理方法

緩沖液

ＥＢ濃度較低

（< 0.5mg/L）

在排入下水道之前，緩沖液請先用過濾器或“茶包”處理。確定緩沖液中在紫外燈下無熒光方可下排。

儲備溶液，氯化銫溶液

ＥＢ濃度較高

（ 1-10mg/mL）

濃度之高，使得處理EB的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關(guān)部門專業(yè)人員處理。

處理用過的過濾器和“茶包”

ＥＢ在（過濾/吸收過程）污染

將已用的過濾器和茶包明確標(biāo)記。用過的過濾器和茶包交由相關(guān)部門處理。

凝膠

ＥＢ濃度低

（ 3-5mg/L）

先將凝膠晾干，裝入的袋子中做好標(biāo)記后，再交由相關(guān)部門處理。

污染的物件

手套，清理灑落EB用過的材料，以及實驗室中污染ＥＢ的物品

破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器，其他材料可擺放整齊后裝入袋中做好標(biāo)記，交由相關(guān)部門處理。

晶體及粉末

含有較純或濃縮過的EB

交由相關(guān)部門處理。

廢液	描述	廢棄處理方法
緩沖液	ＥＢ濃度較低（< 0.5mg/L）	在排入下水道之前，緩沖液請先用過濾器或“茶包”處理。確定緩沖液中在紫外燈下無熒光方可下排。
儲備溶液，氯化銫溶液	ＥＢ濃度較高（ 1-10mg/mL）	濃度之高，使得處理EB的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關(guān)部門專業(yè)人員處理。
處理用過的過濾器和“茶包”	ＥＢ在（過濾/吸收過程）污染	將已用的過濾器和茶包明確標(biāo)記。用過的過濾器和茶包交由相關(guān)部門處理。
凝膠	ＥＢ濃度低（ 3-5mg/L）	先將凝膠晾干，裝入的袋子中做好標(biāo)記后，再交由相關(guān)部門處理。
污染的物件	手套，清理灑落EB用過的材料，以及實驗室中污染ＥＢ的物品	破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器，其他材料可擺放整齊后裝入袋中做好標(biāo)記，交由相關(guān)部門處理。
晶體及粉末	含有較純或濃縮過的EB	交由相關(guān)部門處理。

有效處理后的廢液，再確保檢測不到EB后方可排入下水道（核實熒光）。

處理EB的其他方法可改用低毒性的其他材料來替代ＥＢ（例如，可用SYBR Safe^TM 對DNA凝膠染色），以減少在實驗室里可能發(fā)生的危險。

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