在偏光顯微鏡的日常使用中，各實(shí)驗(yàn)室顯微鏡冷凍置換的具體作法不同，下面介紹的是顯微鏡D. C. Pease實(shí)驗(yàn)室的方法，此法的優(yōu)點(diǎn)是，冷凍與置換過(guò)程可在同一容器內(nèi)完成，避免轉(zhuǎn)換容器帶來(lái)的麻煩。
徠卡顯微鏡冷凍劑與置換劑均使用70%甘醉(Ethyleneglycol，水溶液)。將甘醉用干冰冷卻到一770C.把新鮮樣品投入其中，即可達(dá)到冷凍的目的.這里，甘醉可起冷凍保護(hù)劑作用。
將甘醉溫度升至一500C。在此溫度下，甘醉不會(huì)凍結(jié)，并可將組織內(nèi)的冰置換出來(lái)。在甘醇中的組織數(shù)小時(shí)內(nèi)可變得透明，說(shuō)明置換過(guò)程在進(jìn)行中;為達(dá)到置換需要過(guò)夜。在這期間，不斷搖動(dòng)樣品。偏光置換完成后，將樣品轉(zhuǎn)入純的甘醇，以便樣品中的水能脫出。
顯微鏡經(jīng)甘醉置換的組織可用輕乙基丙烯酸醋或9丙基丙烯酸酷包埋，因?yàn)楦首砜梢耘c上述樹酷直接混溶。如欲用環(huán)氧樹脂包埋，數(shù)碼組織則需通過(guò)氧化丙烯過(guò)渡.
為了避免水溶性成份的移位和流失。顯微鏡冷凍置換后的樣品在切片和染色時(shí)均不再接觸水。為此，切片刀的槽液應(yīng)使用甘醉。數(shù)碼顯微鏡染色時(shí)可用磷鎢酸或醋酸鈾，兩者均可溶于甘醉，因此，實(shí)際上采用的是負(fù)染法。染色后，顯微鏡將多余染液用濾紙吸去，把載網(wǎng)放入真空噴鍍儀真空罩內(nèi)，抽低真空(只開機(jī)械泵)，使甘醉蒸發(fā)后，即可在數(shù)碼顯微鏡下觀察。
會(huì)員1.png)