分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
紫外可見分光光度計(jì)通常分為單光束、雙光束和雙波長三種類型。
一、單光束紫外可見分光光度計(jì):
單個(gè)光束指的是從光源發(fā)出的光,通過單色器等。一系列光學(xué)元件穿過吸收單元,并且當(dāng)在探測器上照射時(shí)總是被照射為光束。它只有一束光(光束只能交替通過參考溶液、樣品溶液),一個(gè)比色皿和一個(gè)光電轉(zhuǎn)換器。工作時(shí),光路,首先通過多特定溶液,然后通過樣品溶液進(jìn)行光強(qiáng)度測量。
單光束分光光度計(jì)的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡單、價(jià)格低,主要適用于定量分析。測量結(jié)果受電源波動(dòng)的影響很大,很容易給測量結(jié)果帶來很大的誤差。因此,他們的地位有限。一般來說,高要求制藥行業(yè)、質(zhì)量檢驗(yàn)線加上不適合使用單光束紫外可見分光光度計(jì);
雙光束紫外可見分光光度計(jì):
雙光束是一種具有兩個(gè)單色光的紫外可見分光光度計(jì)。其光路設(shè)計(jì)基本上類似于單光束分光光度計(jì)。不同之處在于在單色器和吸收弛豫之間添加切割器。
該功能是將一個(gè)光束分成兩個(gè)相等強(qiáng)度的等光,在一定頻率下,一個(gè)通過參考溶液,另一個(gè)通過樣品溶液。然后,檢測器交替地接收參考信號(hào)和采樣信號(hào)。在接收到的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)后,由前置放大器放大,進(jìn)一步解調(diào)為放大等,后由顯示系統(tǒng)顯示
三、雙波長紫外可見分光光度計(jì):
雙波長分光光度計(jì)使用兩個(gè)單色儀同時(shí)獲得兩個(gè)不同波長的單色光。光路是分開的。由光源發(fā)出的光被兩個(gè)單色器分開,以分離波長為4:和4z的單色光。通過調(diào)光器,兩個(gè)光束以一定的時(shí)間間隔交替照射到含有樣品測試溶液的相同吸收室,并且測試溶液在波長4'處的透射率或吸光度。檢測器顯示42和42。
雙波長分光光度計(jì)不僅可以測量高濃度樣品、多組分混合樣品,而且混濁樣品比單波長測量更靈敏。更具選擇性。在雙波長測量中,兩個(gè)波長的光通過相同的吸收單元,并且通過消除由、位置的差異和參考溶液的制備引起的誤差,pJ可以顯著提高測量的準(zhǔn)確度。