細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程，主要包括準(zhǔn)備、取材、培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇4步。為保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用一196℃液氮溫度，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲基亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，Z終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時間幾乎是無限的。

目前美國標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫或細(xì)胞銀行（ATCC）液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系（1992），其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系和來自不同物種的近75個雜交瘤細(xì)胞株。

二、胚胎冷凍保存技術(shù)

胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護(hù)劑保存胚胎的一門技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀(jì)后半葉隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，目前已成為了現(xiàn)代生命科學(xué)研究*的手段之一。動物胚胎的冷凍保存原理就是因為低溫降低了胚胎內(nèi)的變質(zhì)反應(yīng)速度，溫度越低，胚胎保存時間就越長。

目前已研究出多種胚胎冷凍保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植冷凍法和玻璃化冷凍法等。其中玻璃化冷凍法的步驟如下：

①將胚胎在室溫下放人25％玻璃化溶液（VS液）中預(yù)處理15min；

②將預(yù)處理后的胚胎放在高濃度（75％一90％）的VS液中保存20—40min；

③將經(jīng)過兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。

此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質(zhì)，均可達(dá)到很好的長期存儲的效果。

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液氮罐在生物學(xué)實驗中的應(yīng)用

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