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更新時間:2023-06-27 07:23:52瀏覽次數(shù):144次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)細胞轉(zhuǎn)染試劑 QuickShuttle-Enhanced 增強型 貨號:KX0110042 含量:0.8 ml 用途:(1)用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建; (2)用于難轉(zhuǎn)哺乳動物細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建。
細胞轉(zhuǎn)染-QuickShuttle-Enhanced-轉(zhuǎn)染試劑增強型
貨號:KX0110042
含量:0.8 ml
用途:
(1)用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建;
(2)用于難轉(zhuǎn)哺乳動物細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建。
注意事項:
1. 質(zhì)粒 DNA:請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。
2. 稀釋液:0.85%(W/V)生理鹽水,用低內(nèi)毒素純水配制,高壓消毒或除菌過濾。
3. 培養(yǎng)基:經(jīng)過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測試,推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM,若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。
4. 以 24 孔細胞板轉(zhuǎn)染實驗為例,推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5µl, 請在正式實驗前根據(jù)不同細胞和不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化。
5. 如果實驗目的在于篩選抗藥性穩(wěn)定細胞系,可在細胞傳代后尚未貼壁時直接進行轉(zhuǎn)染,從而可節(jié)省 18~24 小時的轉(zhuǎn)染前細胞培養(yǎng)時間。 使用方法:
1. 轉(zhuǎn)染前 18~24 小時接種細胞到 24 孔細胞板中,每孔 5~10×104細胞,1ml 培養(yǎng)基。
備注:如果篩 選抗藥性穩(wěn)定細胞系,可以考慮簡化的實驗步驟,即在細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉(zhuǎn)染,無 需 18~24 小時的等候時間。
2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。
備注:質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的 量需要根據(jù)不同細胞和不同培養(yǎng)基來優(yōu)化,但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。
3. 合并上述兩溶液并混勻。備注:無需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。
4. 將上述復合物直接加入到細胞培養(yǎng)基中,輕搖細胞板或用加樣器吸打混勻。
備注:轉(zhuǎn)染復合物可直接 加入含血清的細胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染。在極少情況下會出現(xiàn)貼壁細胞脫落現(xiàn)象,可先從待轉(zhuǎn)染細胞孔中吸取 500µl 培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復合物預混后再加入細胞中。若在細胞瓶中進行轉(zhuǎn)染,直接加入到無細胞 貼壁的對面或側(cè)面并搖勻即可。
5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養(yǎng)。備注:無需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時補加血清或更換培養(yǎng) 基。
6. 24~72 小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。
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