蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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更新時間：2023-06-20 09:13:01瀏覽次數(shù)：95次
聯(lián)系我時，請告知來自 儀表網(wǎng)3T3誘導(dǎo)分化試劑盒產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高小鼠細(xì)胞成骨誘導(dǎo)效率；
3T3誘導(dǎo)分化試劑盒
3T3誘導(dǎo)分化試劑盒 產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高小鼠細(xì)胞成骨誘導(dǎo)效率；
3T3誘導(dǎo)分化試劑盒使用說明
1. 成脂誘導(dǎo)分化操作
1.1 接種干細(xì)胞 取對數(shù)生長期的細(xì)胞， 按 照 2.0×10e4 cells/cm2 的細(xì)胞密度接種至培養(yǎng)器皿，于 37℃， 5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至匯合度 90~99%，棄掉 上清，加入成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液。
NOTE：如細(xì)胞貼壁性較差，建議使用 0.1%明膠對培養(yǎng)底 面進(jìn)行包被。
1.2 細(xì)胞分化誘導(dǎo) 于 37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約 3 天，更 換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基維持液，培養(yǎng) 1 天后， 再更換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液，繼續(xù)培養(yǎng) 3 天。 按照以上換液頻率誘導(dǎo) 14~21 天，并注意觀 察細(xì)胞形態(tài)變化。根據(jù)細(xì)胞誘導(dǎo)形成的脂滴數(shù)量 和大小，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時間，并進(jìn)行染色 鑒定。
2. 染色鑒定
2.1 細(xì)胞固定 吸去培養(yǎng)基使用適量 1×PBS 清洗一次，棄去 后取適量 4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室 溫固定 30~60 min，棄去固定液再使用 1×PBS 清 洗兩次。
2.2 油紅 O 染色 取生理鹽水或1×PBS與油紅O原液配制油紅 O工作液（油紅O原液: 生理鹽水=3:2），現(xiàn)用現(xiàn) 配。配制后可對油紅O工作液進(jìn)行離心，以沉淀 染色液中的過飽和析出物。向清洗干凈的誘導(dǎo)孔 內(nèi)加入適量油紅O工作液，靜置染色30min。吸走 油紅O工作液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1 ×PBS避免細(xì)胞干燥。
2.3 誘導(dǎo)評估
顯微鏡下觀察成脂染色效果，并進(jìn)行圖像采 集和誘導(dǎo)評估。誘導(dǎo)成功時，脂滴與油紅 O 染料 結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。 NOTE: 干細(xì)胞的成脂分化水平因細(xì)胞類型、細(xì)胞供體來 源，培養(yǎng)條件、細(xì)胞代次、細(xì)胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。
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