蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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更新時間：2023-04-10 08:12:30瀏覽次數(shù)：181次
聯(lián)系我時，請告知來自 儀表網(wǎng)QuickShuttle-Hela 轉染試劑（Hela 細胞用）
QuickShuttle-Hela 轉染試劑（Hela 細胞用）
貨號：KX0110045
含量：0.8 ml
用途：用于 Hela 細胞的瞬時轉染和穩(wěn)定細胞系構建（立傳立轉）。
注意事項：
1. 質(zhì)粒 DNA：請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。
2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。
3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。
4. 以 24 孔細胞板轉染實驗為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2µg、轉染試劑用量為 3~5µl， 請在正式實驗前根據(jù)不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化。
5. 立傳立轉要求使用生長旺盛的細胞，即細胞生長至 80-90%成片或剛長滿。若使用生長過老的細胞， 將明顯影響立傳立轉的效率。
6. 立傳立轉對細胞狀態(tài)要求較高，如果轉染效果不理想，可按 QuickShuttle-Enhanced 的轉染方法（見本 說明書第 4 頁），在細胞貼壁后進行標準轉染操作。
QuickShuttle系列轉染試劑轉染效果圖
使用方法 ：
1. 將新鮮消化的 Hela 細胞接種到 24 孔細胞板中，每孔 1~2×105細胞，1ml 培養(yǎng)基。備注：可在生 長旺盛的細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉染，無需 18~24 小時的等候時間。
2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。備注：質(zhì)粒 DNA 和轉染試劑的 量需要根據(jù)不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。
3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。
4. 將上述復合物直接加入到細胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。備注：轉染復合物可直接加入含血清的 細胞培養(yǎng)基中進行轉染。
5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養(yǎng)。備注：無需在轉染后 4~6 小時補加血清或更換培養(yǎng) 基。
6. 24~72 小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。
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