LH-PCR非洲豬瘟實驗室檢測設(shè)備清單-????? ????? ?????? ????? ??? ???????? ?????????LH-PCR非洲豬瘟實驗室檢測設(shè)備清單用于運行病毒檢測實驗，并對實驗數(shù)據(jù)進行分析;儀器既可在實驗室內(nèi)操作，又可用于野外科學(xué)實驗，配合相應(yīng)試劑，對取自待檢測樣本的分析物或其他分析物中的目標(biāo)核酸進行快速、準確的定性檢測。

　　儀器配套非洲豬瘟病毒核酸快速檢測試劑盒(熒光 RPA 法)、非洲豬瘟病毒核酸檢測試劑盒(實時熒光 PCR 法)，可以滿足非洲豬瘟核酸現(xiàn)場快速檢測需求?？啥靠焖傩竽令惣膊≡\斷如非洲豬瘟、禽流感、豬瘟、豬藍耳、偽狂犬等疾病，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖場、屠宰場、食品加工廠、肉產(chǎn)品深加工企業(yè)、*、*、檢驗檢疫單位使用。

　　實驗員需要經(jīng)過實驗室技術(shù)和儀器、軟件操作的專門培訓(xùn)，具備熟練的相關(guān)操作技能。

　　儀器特點

　　1.體積小，重量輕，易于攜帶。輕松滿足外出實驗的需求。

　　2.內(nèi)置7寸高清電容屏PDA，觸屏操作，簡便快捷。

　　3.Marlow高品質(zhì)Peltier制冷片，結(jié)合德國PT1000溫度傳感器以及電性電阻加熱補償邊緣的溫度控制模式，大升溫速度6℃，大降溫速度5℃，大大縮短實驗時間。

　　4.整板3s快速采光模式，保證實驗結(jié)果孔位一致性。

　　5.簡潔直觀的軟件引導(dǎo)，輕松開啟檢測實驗。

　　獸用

　　【獸藥名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒

　　商品名稱：無

　　漢語拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

　　英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

　　【主要成分與含量】

　　序號含量1PCR反應(yīng)液1管(1ml/管)2管(5ml/管)Solution B 1.5

　　4陰性對照 1管(0.5ml/管)

　　1管(0.25ml/管)

　　【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結(jié)、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

　　【用法與判定】

　　1 用法

　　1.1 樣品處理及模板準備

　　1.1.1 樣品處理

　　·血液樣品無需處理，取200μl備用。

　　1.1.2 模板準備

　　·將樣本加入到1.5 ml離心管中，加入下表推薦體積的Solution A，渦旋震蕩20 s，并按照下表推薦的處理方法，室溫靜置3-5 min，或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min。

　　·處理后的樣本如在2小時內(nèi)進行下一步試驗，請于4℃保存，如不能立即進行下一步試驗，請于-20℃保存。

　　樣本類型樣本用量Solution A處理溫度及時間Solution B全血10 μl100 μl室溫靜置3-5min100 μl

　　1

　　組織勻漿10 μl100 μl室溫靜置3-5min100 μl備注：組織樣本加入10倍體積的生理鹽水制成組織勻漿液后，可按照血液樣本的處理方法進行處理。

　　1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應(yīng)，效果更佳

　　1.2 熒光PCR擴增

　　1.2.1 試劑準備

　　按下表1體系，在配套PCR管中配制反應(yīng)體系，蓋緊管蓋后瞬時離心10秒，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。

　　體積PCR反應(yīng)液18μl預(yù)準備的模板(樣本/對照)2μl

　　1.2.3 PCR擴增

　　表2 儀器PCR擴增參數(shù)

　　2 判定

　　2.1 合理調(diào)整閾值線，不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。

　　2.2 試劑盒有效性判定

　　·陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的S型曲線。

　　2.3 樣本結(jié)果判定

　　·樣本檢測結(jié)果38

　　·樣本檢測結(jié)果無Ct值，判定為陰性，表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。

　　【注意事項】

　　(1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按步驟執(zhí)行，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。

　　(2)所有試劑應(yīng)在規(guī)定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應(yīng)充分混勻。試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。

　　(3)實驗操作應(yīng)按照國家有關(guān)臨床基因擴增實驗室管理規(guī)范執(zhí)行，實驗過程應(yīng)分區(qū)(試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū))，各區(qū)物品為，不得交叉使用，避免污染。

　　(4)操作臺、移液器、離心機等儀器用品應(yīng)經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應(yīng)進行無酶處理。

　　(5)待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進行處理。

　　(6)為防止熒光干擾，應(yīng)避免使用含熒光物質(zhì)的手套，避免用手直接接觸，預(yù)防交叉污染。

　　(7)檢測結(jié)果為陰性，并不*代表為非感染狀態(tài)，具體診斷需結(jié)合獸醫(yī)臨床。

　　(8)產(chǎn)生假陰性的可能原因為：待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當(dāng)造成DNA降解;樣本中核酸濃度低于低檢測限;病毒待測靶基因出現(xiàn)變異;未經(jīng)驗證的其他干擾因素。

　　(9)產(chǎn)生假陽性的可能原因為：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發(fā)生交叉污染。