圖1：MDCK細(xì)胞管腔結(jié)構(gòu)形成示意圖
然而由于生長方式的特殊性，同一個視野中的不同管腔結(jié)構(gòu)有可能位于不同的層面上，因此在以往的實驗中想要對這樣的樣本進行高通量成像是一個很大的挑戰(zhàn)，往往需要手動對每一個管腔結(jié)構(gòu)進行單獨拍攝，并在后期做圖像分析，而使用高內(nèi)涵成像分析技術(shù)則將這一繁復(fù)的操作過程變得自動化和智能化。
Step 1.智能預(yù)掃
使用高內(nèi)涵的智能預(yù)掃功能，可以先在低倍（5×）下對整孔進行全局掃描，拍攝的同時軟件根據(jù)算法確定視野中每個空腔結(jié)構(gòu)的定位和范圍，剔除不含目的結(jié)構(gòu)視野。
圖2：Optically section in Z → Max. project medial planes
Step2.精細(xì)層掃
然后再自動轉(zhuǎn)換至高倍（20×或63×），分別對含有空腔結(jié)構(gòu)的視野進行高分辨率的精細(xì)層掃，以確保位于不同層面的空腔結(jié)構(gòu)都能夠獲取到圖像。
圖3：Detect polarity orientation → Calculate lumen number
Step3.統(tǒng)計分析
后使用高內(nèi)涵的分析功能模塊對細(xì)胞的極性變化和形成的管腔數(shù)量直接進行統(tǒng)計分析。
圖4：Phenotype binning
總結(jié)
圖5：細(xì)胞極化和管腔數(shù)量分析示意圖。MDCK細(xì)胞團培養(yǎng)24-72h后進行染色，對不同Z軸層面(共8層，每層間隔2μm)成像后采用大投影模式進行顯示和分析，應(yīng)用機器自學(xué)習(xí)模塊對細(xì)胞極化進行自動檢測，并在此基礎(chǔ)上計算形成的內(nèi)腔數(shù)量。
由此可以看出高內(nèi)涵可以很好的解決上皮細(xì)胞3D培養(yǎng)中不規(guī)則分散樣本的定位成像問題，簡化了成像流程，為樣本中特殊結(jié)構(gòu)的自動化成像和分析提供了的解決方案。
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參考文獻(xiàn)
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