商品介紹：

細(xì)胞凍存注意事項：
(1)  細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

類固醇5α還原酶1抗體　英文名；SRD5A1A激酶錨定蛋白5抗體　英文名；AKAP5

類固醇5α還原酶1抗體(5α-Reductase 1)　英文名；SRD5A1A型鉀離子通道調(diào)節(jié)蛋白4抗體　英文名；KCNIP4

類固醇5α還原酶2抗體　英文名；SRD5A2A型流感病毒（H9N2）血凝素HA1抗體　英文名；H9N2 Hemagglutinin HA1

類固醇硫酸酯酶抗體　英文名；Steroid sulfataseA型流感病毒H1N1-M2蛋白抗體　英文名；H1N1 Matrix Protein 2

類固醇受體復(fù)合物蛋白FKBP5抗體　英文名；FKBP51A型流感病毒H3N2-M2蛋白抗體　英文名；H3N2 Matrix Protein 2

類固醇受體激活蛋白2抗體　英文名；NCOA2A型流感病毒H5N1凝集素抗體　英文名；H5N1 Hemagglutinin

類固醇受體激活蛋白3抗體　英文名；SRC3A型流感病毒H5N6凝集素　英文名；H5N6 hemagglutinin

類固醇脫氫酶樣蛋白1抗體　英文名；HSDL1A型流感病毒H7N9凝集素抗體　英文名；H7N9 NA

類固醇脫氫酶樣蛋白NSDHL抗體　英文名；NSDHLA型流感病毒H9N1血凝素型抗體　英文名；H9N1 Hemagglutinin

HTR-8/SVneo人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞類胡蘿卜素裂解雙加氧酶8抗體　英文名；ZmCCD8A型流感病毒PB1-F2抗體　英文名；Influenza A PB1-F2

類腫瘤性抗原MA3抗體　英文名；PNMA3A型流感病毒蛋白PA-X抗體　英文名；Influenza A Protein PA-X

類腫瘤性抗原MA5抗體　英文名；PNMA5A型流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白1抗體　英文名；Influenza A Nonstructural Protein 1

冷休克蛋白DBPA抗體　英文名；DBPAA型流感病毒核蛋白抗體　英文名；H1N1 Nucleoprotein

冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白C2抗體　英文名；CSDC2A型流感病毒核輸出蛋白抗體　英文名；Influenza A Nuclear export protein

冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白抗體　英文名；CIRBPA型流感病毒核衣殼蛋白抗體　英文名；H1N1+H3N2 nucleocapsid protein

離子鈣接頭蛋白單克隆抗體　英文名；AIF1 (9A3)A型流感聚合酶堿性蛋白2抗體　英文名；Influenza A Polymerase basic protein 2

離子鈣接頭蛋白抗體　英文名；AIF1/Iba1B Raf單克隆抗體　英文名；BRAF

離子通道蛋白Kv1.3抗體　英文名；KCNA3B Raf抗體　英文名；BRAF

操作步驟:

(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達(dá)效率。