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貨號 | A01X760 | 規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁細胞 |
公司所有產品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
產品名稱 | 貨號 | A01X760 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | HK2:HK-2 |
分類 | 人細胞系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品介紹:
別稱 | Hk-2 |
種屬 | 人類 |
年齡(性別) | 成人 |
組織來源 | 腎,皮質/近端小管 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
詳情簡介 | HK-2細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2;Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,最后將PA317細胞產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示,HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實,HK-2細胞基因組中含有E6??? |
生物安全等級 | 2 |
生長培養(yǎng)基 | MEM+10% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣,95%;CO2,5% |
溫度 | 37℃ |
受體表達情況 | 受體表達情況 epidermal growth factor (EGF), expressed |
細胞凍存注意事項:
(1) 細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候,這時細胞生長狀態(tài)好,細胞數(shù)量也多,并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸,活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml ),加入已經配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護劑的使用
細胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時,再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內只能存儲少量液氮,需要經常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
操作步驟:
(1) 細胞系培養(yǎng):取6cm細胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉染后不利篩選細胞。
(2) 轉染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉染準備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉染:把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉染后,可在48h-72h細胞長滿之后,提取細胞蛋白或者RNA,驗證敲減/過表達效率。
公司正在出售的產品:
粒細胞分化相關標志物MYADM抗體 英文名;Myeloid MarkerBax重組兔單克隆抗體 英文名;Bax
粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3單克隆抗體 英文名;G-CSFBCL10單克隆抗體 英文名;BCL10
粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3抗體 英文名;G-CSF/CSF3BCL10結合蛋白和激活核轉錄因子抗體 英文名;CARD10
粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3受體抗體 英文名;GCSF ReceptorBCL10抗體 英文名;BCL10
HK-2人腎皮質近曲小管上皮細胞粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子受體α抗體 英文名;GM-CSFR alphaBcl-10重組兔單克隆抗體 英文名;Bcl10
粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子受體β抗體 英文名;IL3RBBcl2 alpha蛋白抗體 英文名;Bcl-2 alpha
衰變加速因子CD55抗體 英文名;CD55p21激活激酶2抗體 英文名;PAK2
衰老標記蛋白30抗體 英文名;Regucalcinp21激活激酶3抗體 英文名;PAK3
衰老關鍵蛋白抗體 英文名;Fibulin 5p21激活激酶4抗體 英文名;PAK4
衰老相關Sigma受體蛋白抗體 英文名;OPRS1p21調控蛋白WISP39/FKBPL抗體 英文名;WISP39
雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體 英文名;DPF2P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑 英文名;CDKN1B/p27 KIP 1
雙鏈RNA結合蛋白Staufen2抗體 英文名;STAU2P2Y1受體抗體/嘌呤受體抗體 英文名;P2Y1
雙鏈RNA結合蛋白Staufen抗體 英文名;StaufenP2Y4受體抗體 英文名;P2Y4
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶(C端)抗體 英文名;ADAR1p38調節(jié)/激活蛋白激酶抗體 英文名;PRAK
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶(N端)抗體 英文名;ADAR1P38相互作用蛋白抗體 英文名;FAM48A
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