商品介紹：

細胞凍存注意事項：
(1)  細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

雙微體2癌基因結(jié)合蛋白抗體　英文名；MDM2BPPacific Blue標記人CD107a單克隆抗體　英文名；human CD107b/Pacific Blue

雙微體2癌基因抗體　英文名；MDM2Pacific Blue標記人CD11b單克隆抗體　英文名；human CD11b/Pacific Blue

雙向染色體細胞分裂蛋白1抗體　英文名；BOD1Pacific Blue標記人CD11c單克隆抗體　英文名；human CD11c/Pacific Blue

雙氧化酶1/甲狀腺氧化酶1抗體　英文名；DUOX1Pacific Blue標記人CD127 (IL7R)單克隆抗體　英文名；human CD127 (IL7R)/Pacific Blue

雙氧化酶2/甲狀腺氧化酶2抗體　英文名；DUOX2Pacific Blue標記人CD14單克隆抗體　英文名；human CD14/Pacific Blue

雙氧化酶成熟因子抗體　英文名；DUOXA1Pacific Blue標記人CD154單克隆抗體　英文名；human CD154/Pacific Blue

雙氧化酶激活因子2抗體　英文名；DUOXA2Pacific Blue標記人CD15單克隆抗體　英文名；human CD15 (SSEA-1)/Pacific Blue

雙重特異性磷酸酶27抗體　英文名；DUSP27Pacific Blue標記人CD16單克隆抗體　英文名；human CD16/Pacific Blue

人胚肺成纖維細胞；IMR-90水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體　英文名；Os05g0477200 proteinPacific Blue標記人CD25單克隆抗體　英文名；human CD25/Pacific Blue

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體　英文名；ABHD13Pacific Blue標記人CD33單克隆抗體　英文名；human CD33/Pacific Blue

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14B抗體　英文名；ABHD14BPacific Blue標記人CD38單克隆抗體　英文名；human CD38/Pacific Blue

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體　英文名；ABHD15Pacific Blue標記人CD44單克隆抗體　英文名；human CD44/Pacific Blue

水通道蛋白0抗體　英文名；AQP0Pacific Blue標記人CD56 (NCAM)單克隆抗體　英文名；human CD56 (NCAM)/Pacific Blue

水通道蛋白1抗體　英文名；AQP1Pacific Blue標記人CD57單克隆抗體　英文名；human CD57/Pacific Blue

水通道蛋白-2抗體　英文名；AQP2Pacific Blue標記人CD9單克隆抗體　英文名；human CD9/Pacific Blue

水通道蛋白-3抗體　英文名；AQP3Pacific Blue標記人HLA-DR單克隆抗體　英文名；human HLA-DR/Pacific Blue

操作步驟:

(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。