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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號(hào) | A01X703 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
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細(xì)胞形態(tài) | 生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞 | 規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
產(chǎn)品名稱 | DLD-1人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 | 貨號(hào) | A01X703 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | DLD1:DLD-1 |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
別稱 | DLD 1 |
種屬 | 人類 |
年齡(性別) | 成人 |
組織來(lái)源 | 結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
詳情簡(jiǎn)介 | DLD-1細(xì)胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細(xì)胞與HCT-15細(xì)胞相似,說(shuō)明這兩者是來(lái)自同一個(gè)人的不同克隆。DLD-1細(xì)胞和HCT-15細(xì)胞的遺傳起源可通過(guò)DNA指紋鑒定證實(shí),但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記一致改變或數(shù)目上一致改變。DLD-1細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-),p53抗原表達(dá)呈陽(yáng)性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)C→T點(diǎn)突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。DLD- |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | RPMI-1640+10% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~24-48小時(shí) |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣,95%;CO2,5% |
溫度 | 37℃ |
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過(guò)大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。
公司正在出售的產(chǎn)品:
磷酸化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激酶抗體 英文名;phospho-MAPKAPK5 (Ser93)
磷酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體 英文名;Phospho-BLNK (Tyr84)
磷酸化氨基末端激酶2抗體 英文名;phospho-MAPK8 ( Thr183 + Tyr185)
磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1重組兔單克隆抗體 英文名;Phospho-SIRT1 (Ser47)
磷酸化蛋白激酶C α/β2重組兔單克隆抗體 英文名;Phospho-PKC alpha (Thr638)
磷酸化端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體 英文名;phospho-p23 (Ser113)
磷酸化干擾素誘導(dǎo)的雙鏈RNA活化蛋白激酶抗體 英文名;Phospho-PKR (Thr446 + Thr451)
磷酸化紅細(xì)胞生成素受體抗體 英文名;phospho-EPO Receptor (Tyr485)
磷酸化鉀通道蛋白DRK1抗體 英文名;phospho-Kv2.1 (Tyr128)
磷酸化磷酸神經(jīng)膜抗體 英文名;phospho-FXYD1 (Ser83)
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白67抗體 英文名;CCDC67
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD8抗體 英文名;CHCHD8
DLD-1人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞顆粒酶B抗體 英文名;Granzyme B
口蹄疫病毒VP1抗體 英文名;FMDV VP1
跨膜蛋白174抗體 英文名;TMEM174
跨膜蛋白9超家族成員4抗體 英文名;TM9SF4
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