當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞系>>人細(xì)胞系>> KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號 | A01X815 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞形態(tài) | 骨髓母細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | A01X815 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | KU812:KU812 |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
商品介紹:
別稱 | KU812 |
年齡(性別) | 男;38歲 |
組織來源 | 器官:外周血; 疾?。郝运栊园籽?; 細(xì)胞類型:嗜堿性 |
生長特性 | 懸浮細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 骨髓母細(xì)胞樣 |
詳情介紹 | KU812細(xì)胞是從一位慢性髓性白血病患者暴發(fā)期的外周血建立的細(xì)胞株,KU812細(xì)胞至少有一個Ph1(費(fèi)城)染色體。KU812細(xì)胞有一些嗜堿性細(xì)胞的標(biāo)記(如Fc受體、堿性顆粒,生成組胺),而淋巴標(biāo)記陰性。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | RPMI-1640+20% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 3×10^5個/mL |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時間 | ~40-60 hours |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣,95%;CO2,5% |
溫度 | 37℃ |
抗原表達(dá)情況 | CD3; Homo sapiens alanyl (membrane) aminopeptidase (ANPEP, CD13); Homo sapiens |
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候,這時細(xì)胞生長狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時,再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。
公司正在出售的產(chǎn)品:
RNA結(jié)合蛋白26抗體 英文名;RBM26 金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體
RNA聚合酶II抗體 英文名;RNA polymerase II 緊密連接蛋白5抗體
p53凋亡刺激蛋白1抗體 英文名;ASPP1 環(huán)指蛋白1抗體
Pacific Blue標(biāo)記人CD127 (IL7R)單克隆抗體 英文名;human CD127 (IL7R)/Pacific Blue 環(huán)指蛋白59抗體
Pacific Blue標(biāo)記小鼠Ly-6A/E單克隆抗體 英文名;mouse Ly-6A/E/Pacific Blue 黃熱病毒包膜糖蛋白抗體
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK9蛋白抗體 英文名;PDZD9 活化誘導(dǎo)分子CD69抗體
PE-Cy5標(biāo)記人CD55單克隆抗體 英文名;human CD55/PE-Cy5 肌動蛋白輔助蛋白類樣蛋白抗體
PE-Cy5標(biāo)記小鼠CD8a單克隆抗體 英文名;mouse CD8a/PE-Cy5 肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型4抗體
PE-Cy7標(biāo)記人CD57單克隆抗體 英文名;human CD57/PE-Cy7 肌球蛋白14抗體
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人CD117 (c-kit)單克隆抗體 英文名;human CD117 (c-kit)/PerCP-Cy5.5 肌球蛋白輕鏈激酶2抗體
KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞PerCP標(biāo)記的結(jié)蛋白抗體 英文名;Desmin / PerCP 肌微管蛋白MTMR5抗體
PE標(biāo)記人CD117 (c-kit)單克隆抗體 英文名;human CD117 (c-kit)/PE 雞新城疫病毒抗體
磷酸化p21激活激酶4抗體 英文名;Phospho-PAK4 (Ser99)
磷酸化Smad2抗體 英文名;phospho-Smad2 (Ser465)
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