商品介紹：

細胞凍存注意事項：
(1)  細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CD8抗體  磷酸化白細胞介素3受體β抗體　英文名；phospho-IL3RB (Tyr593)

c-fos抗體  磷酸化雌激素受體α抗體　英文名；Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser118)

COREST蛋白抗體  磷酸化蛋白激酶C亞性抗體　英文名；Phospho-PKA alpha + beta (Thr198)

CTP合成酶2抗體  磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體　英文名；Phospho-NEDD4-2 (Ser342)

CYP27B1單克隆抗體  磷酸化核仁蛋白C23抗體　英文名；phospho-Nucleolin (Thr76)

DCST1蛋白抗體  磷酸化活化復(fù)制因子2重組兔單克隆抗體　英文名；phospho-ATF2 (Thr71)

DHX33蛋白抗體  磷酸化接頭蛋白Gab 1抗體　英文名；Phospho-Gab1 (Tyr627)

NCI-H295R人腎上腺皮質(zhì)細腺癌細胞DMRTC1蛋白抗體  磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體　英文名；phospho-PIK3R1 (Tyr368)

AN1型鋅指蛋白5抗體  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體　英文名；CCDC7

APC-Cy7標記人CD64單克隆抗體  抗Ⅵ型膠原抗體　英文名；Collagen VI alpha 1

APC標記人CD14單克隆抗體  可溶性附著蛋白α-SNAP抗體　英文名；Alpha SNAP

APC標記人CD43單克隆抗體  跨膜γ羧基酸蛋白1抗體　英文名；PRRG1

APC標記小鼠CD122單克隆抗體  跨膜蛋白29抗體　英文名；FAM156A

APC標記小鼠Ly-6G/Ly-6C單克隆抗體  跨膜蛋白SEMA4A抗體　英文名；SEMA4A

操作步驟:

(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。