當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TPⅢNP人Ⅲ型前膠原肽ELISA試劑盒實驗原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | PⅢNP人Ⅲ型前膠原肽ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human N-terminal procollagen Ⅲ propeptide, PⅢNP Elisa Kit |
貨號 | FS-H63442 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
Amanita│pantherina (DC.) Krombh. 豹斑鵝膏菌Amanita│pantherina (DC.) Krombh.分離基物:馬尾松下斜面培養(yǎng)物安全等級:1150生長條件:25存儲條件:定期移植法 純度:98%
Pachykytospora│alabamae (Berk. & Cooke) Ryvarden 亞拉巴馬全緣孔菌Pachykytospora│alabamae (Berk. & Cooke) Ryvarden分離基物:子實體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:25存儲條件:定期移植法 純度:98%
Fomitiporia│punctata (Fr.) Murrill 斑點嗜藍(lán)孢孔菌Fomitiporia│punctata (Fr.) Murrill分離基物:子實體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:25存儲條件:定期移植法 純度:99%
rmitomyces│microcarpus (Berk. & Broome) R. Heim 果雞樅rmitomyces│microcarpus (Berk. & Broome) R. Heim分離基物:子實體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:28存儲條件:定期移植法 純度:99%
Fomitopsis│cupreorosea (Berk.) J. Carranza & Gilb. 迷孔肉色扇Fomitopsis│cupreorosea (Berk.) J. Carranza & Gilb.分離基物:菌體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:27存儲條件:定期移植法 純度:99%
Russula│albida Peck 白菇Russula│albida Peck分離基物:菌體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:27存儲條件:定期移植法 純度:98%
Russula│alutacea (Fr.) Fr. 大紅菇Russula│alutacea (Fr.) Fr.分離基物:菌體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:27存儲條件:定期移植法 純度:99%
Russula│decolorans (Fr.) Fr. 褪色紅菇Russula│decolorans (Fr.) Fr.分離基物:菌體斜面培養(yǎng)物模式菌株:no14生長條件:27存儲條件:定期移植法 純度:99%
PⅢNP人Ⅲ型前膠原肽ELISA試劑盒實驗原理Collagen VII Ⅶ膠原抗體羊藿苷4-甲硫基苯乙Human MANF (Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit
Collagen V Ⅴ型膠原抗體異補骨脂素4-甲硫基苯乙Human MAP2K1 (Mitogen Activated Protein Kinase Kinase 1) ELISA Kit
Collagen X Ⅹ型膠原抗體補骨脂素4-甲硫基苯乙Human AhR (Aryl Hydrocarbon Receptor) ELISA Kit
Contactin-6 NB-3神經(jīng)粘附蛋白抗體秦皮甲素Eletriptan HBrHuman ARSA (Arylsulfatase A) ELISA Kit
Claudin 1 緊密連接蛋白1抗體秦皮乙素四甲基化銨四水合物Human ASGR2 (Asialoglycoprotein Receptor 2) ELISA Kit
Claudin 3 緊密連接蛋白3抗體熊果四甲基化銨四水合物Human ASGR1 (Asialoglycoprotein Receptor 1) ELISA Kit
Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體冰片四甲基化銨四水合物Human ASM (Acid Sphingomyelinase) ELISA Kit
Cortactin 皮層肌動蛋白抗體菝契皂苷元1-Boc-2-(氨甲基)吡咯烷Human MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) ELISA Kit
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