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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號(hào) | A01X951 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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商品介紹:
產(chǎn)品名稱(chēng) | SK-BR-3+LUC人乳腺癌細(xì)胞 | 貨號(hào) | A01X951 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | SK-BR-3+LUC |
分類(lèi) | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類(lèi)或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿(mǎn) 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
HMGB-1(Mouse High mobility group protein B1) ELISA Kit 小鼠高遷移率族蛋白B1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD229/SLAMF3/FITC 熒光素標(biāo)記CD229抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
Mouse neurofilament protein,NF ELISA Kit 小鼠神經(jīng)絲蛋白 96T
MTM1 英文名稱(chēng): 肌微管素1抗體 0.2ml
A2BP1 英文名稱(chēng): 共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
Anti-CD229/SLAMF3/FITC 熒光素標(biāo)記CD229抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
HBeAb(Mouse hepatitis B virus e antibody) ELISA Kit 小鼠乙型肝炎e抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Caspase-13/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ELAVL1/HuR ELAVL1抗體 規(guī)格 0.2ml
I CTP ELISA Kit 小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽 96T
MTLR 英文名稱(chēng): 胃動(dòng)素受體抗體 0.1ml
Apg10 英文名稱(chēng): 自噬相關(guān)蛋白10抗體 0.2ml
Anti-Caspase-13/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CANX/FITC 熒光素標(biāo)記抗鈣連蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ENAH/MENA ENAH蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Plant Indole-3-acetic acid ,IAA ELISA Kit 植物吲哚乙酸 96T
MTLC 英文名稱(chēng): 致癌基因抗體 0.2ml
APOA4 英文名稱(chēng): 載脂蛋白A4抗體 0.1ml
Anti-CANX/FITC 熒光素標(biāo)記抗鈣連蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
PY(Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks) ELISA Kit 小鼠吡啶交聯(lián)物Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD44/PE 熒光素PE標(biāo)記CD44抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DR6/CD358 細(xì)胞調(diào)亡素/壞死因子受體死亡受體6抗體 規(guī)格 0.2ml
HSV- I IgM 單皰疹Ⅰ型病毒 IgM(捕獲法一步法)
MTHFR 英文名稱(chēng): 亞甲基四氫還原酶MTHFR抗體 0.1ml
ARH 英文名稱(chēng): 低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體 0.2ml
Anti-CD44/PE 熒光素PE標(biāo)記CD44抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
L-Selectin/CD62L ELISA Kit 大鼠L選擇素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AK-1/FITC 熒光素標(biāo)記腺苷酸激酶-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FBXL21/FBL3B FBXL21蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
HL(Mouse hepatic lipase) ELISA Kit 小鼠肝脂酶 96T
SK-BR-3+LUC人乳腺癌細(xì)胞MTGR1 英文名稱(chēng): 髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
A2LD1 英文名稱(chēng): A2LD1蛋白抗體 0.2ml
Anti-AK-1/FITC 熒光素標(biāo)記腺苷酸激酶-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過(guò)大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。
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