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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號(hào) | A01X1006 | 規(guī)格 | 1×10? cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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商品介紹:
產(chǎn)品名稱 | U251 MG (KO)人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 | 貨號(hào) | A01X1006 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | U251 MG (KO) |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
GHRP-Ghrelin(Mouse growth hormone releasing peptide-Ghrelin) ELISA Kit 小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelinMulti-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-cath-D/CD /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh eIF3F 真核翻譯起始因子3F抗體 規(guī)格 0.1ml
PS ELISA Kit 小鼠0脂酰絲酸 96T
Myeloperoxidase/c-ANCA 英文名稱: 髓過氧化物酶抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)IgG抗體 0.1ml
Phospho-Ack1 (Tyr326) 英文名稱: 0酸化Ack1抗體 0.1ml
Anti-cath-D/CD /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
BMPs(Mouse bone morphogenetic proteins) ELISA Kit 小鼠骨形成蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CCK8/FITC 熒光素標(biāo)記膽囊收縮素/縮膽囊素抗體(八肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EGF(mouse) 表皮生長(zhǎng)因子抗體(小鼠) 規(guī)格 0.1ml
Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV ELISA Kit 羅氏沼蝦諾達(dá)病毒 96T
Myelin Protein Zero 英文名稱: 外周髓0脂P0蛋白/P0蛋白抗體 0.1ml
ABH1 英文名稱: ALKB蛋白抗體 0.2ml
Anti-CCK8/FITC 熒光素標(biāo)記膽囊收縮素/縮膽囊素抗體(八肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
AsAb ELISA Kit 大鼠抗抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AE3/FITC 熒光素標(biāo)記陰離子交換蛋白3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FbxW2 FbxW2蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
TNF- Alpha(Human Tumor necrosis factor Alpha) ELISA KIT 人壞死因子α 96T
Myelin PLP 英文名稱: 髓0酯髓鞘蛋白1抗體 0.2ml
AKAP7 英文名稱: 蛋白激酶A錨定蛋白7抗體 0.2ml
Anti-AE3/FITC 熒光素標(biāo)記陰離子交換蛋白3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
RBP-4(Mouse Retinol-binding protein 4) ELISA Kit 小鼠結(jié)合蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CCL1/I-309/TCA3/FITC 熒光素標(biāo)記嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EGF(human) 表皮生長(zhǎng)因子抗體(人) 規(guī)格 0.1ml
IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta) ELISA Kit 人β干擾素 96T
U251 MG (KO)人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MyD88 英文名稱: 髓樣分化蛋白抗體 0.1ml
ARPM1 英文名稱: 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白M1抗體 0.2ml
Anti-CCL1/I-309/TCA3/FITC 熒光素標(biāo)記嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
OT/BGP ELISA Kit 大鼠骨鈣素/骨谷蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ATF4/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh factor XIII 因子13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子) 規(guī)格 0.2ml
BGP(Osteocalcin/Bone Gla-protein)ELISA Kit 兔骨鈣素 ELISA試劑盒 96T
Mycobacterium tuberculosis Ag85B 英文名稱: 桿菌抗體 0.2ml
ABCG2 英文名稱: 三0酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體 0.1ml
Anti-ATF4/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。
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