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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96TPRSS人絲氨酸蛋白酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
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公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類(lèi)型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱(chēng) | PRSS人絲氨酸蛋白酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱(chēng) | Human serine protease, PRSS Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63838 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
1,1-二基-2-三硝基肼 DPPH別名: 1,1-二基-2-苦基肼;英文名稱(chēng): 1,1-DIPHENYL-2-PICRYLHYDRAZYL: 1898-66-4分子式: C18H12N5O6
乙酰丁香有效期: 3年溶解性: 100mg/mL in DMSO別名: 4′-Hydroxy-3′,5′-dimethoxyacetophenone;英文名稱(chēng): Acetosyringone
順鉑有效期: 2年級(jí)別: 醫(yī)藥級(jí)溶解性: 推薦DMF溶解別名: 氨鉑 順二二氨基鈀
4-硝基磷二鈉鹽 p-NPP有效期: 2年級(jí)別: Reagent Grade溶解性: 50 mg/ml War別名: 對(duì)硝基酚磷酯二鈉鹽;磷4-硝基酯二鈉鹽,六水; 對(duì)硝基磷二鈉鹽;Disodium p-Nitrophenyl phospha; p-Nitrophenyl disodium orthophorpha
2,6-二酚靛酚鈉有效期: 2年溶解性: 10 mg/L War別名: 2,6-二吲哚酚鈉;2,6-二酚靛酚鹽; 2,6-Dichloro-N-(4-hydroxyphenyl)-1,4- benzoquinoneimine sodium salt;DCIP;DPIP 2,6-Dichlorobenzenone-indophenol sodium salt; 2,6-Dichlorophenolindophenol sodium salt hydra;英文名稱(chēng): 2,6-Dichloroindophenol sodium salt hydra
吩嗪甲酯 PMS有效期: 4年溶解性: 200mg/ml in war來(lái)源: streptomyces griseus別名: N-甲基吩嗪 甲基鹽;甲基N-甲基吩嗪; 吩嗪二甲基酯;吩嗪二甲酯鹽;
水合茚三有效期: 3年級(jí)別: AR溶解性: 10 mg/mL War別名: 并環(huán)丙三
蒽有效期: 2年級(jí)別: AR溶解性: 100mg/mL in CHCL3別名: 9,10-二氫-9-氧蒽
PRSS人絲氨酸蛋白酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Transferrin 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體致瘤磷蛋白32相關(guān)蛋白1抗體3-羧基苯Mouse BF (factor B) ELISA Kit
TRF2 端粒結(jié)合蛋白2抗體腺苷脫氨酶抗體E-2-辛烯Mouse FAS/CD95 (Factor Related Apoptosis) ELISA Kit
omerase Binding Protein, P23 端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體E-2-辛烯Mouse FSCN (Fascin) ELISA Kit
TRIM32 TRIM32抗體ATRNL1蛋白抗體(R)-(+)-2-苯甘氨Mouse FABP5 (Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal) ELISA Kit
TrK A 酪氨激酶A抗體AFP4a蛋白抗體(R)-(+)-2-苯甘氨Mouse FABP6 (Fatty Acid Binding Protein 6, Ileal) ELISA Kit
Phospho-TrkA (Tyr490)/TrkB (Tyr516) 磷化酪氨激酶A抗體鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體4-烯氧基-2-羥基二苯甲Mouse FBXO2 (F-Box Protein 2) ELISA Kit
Phospho-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) 磷化酪氨激酶A抗體鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體4-烯氧基-2-羥基二苯甲Mouse ERβ (Estrogen Receptor Beta) ELISA Kit
Phospho-TrkA (Tyr785)/TrkB (Tyr816) 磷化酪氨激酶A抗體β淀樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體2--4-(基)苯Mouse FE (Ferritin) ELISA Kit
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