細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：NK細胞    

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

貨號：FS-01X9877

產(chǎn)品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Vascuolar cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Fibrinogen,Fbg ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit D-Dimer,D2D ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子白介1可溶性受體I (IL-1sR Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sR Ⅰ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit prothrombin fragment 1+2,F1+2 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子腎上腺髓質(zhì)(ADM)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit lipoprotein α,Lp-α ELSIA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit transforming growth factorβ2,TGFβ2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔一氧化氮合成(NOS)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit nitric oxide synthase,NOS ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔尿激型纖溶原激活物(uPA)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit urokinase plasminogen activator,uPA ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit matrix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
NK細胞ABHD13  水解結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體規(guī)格: 0.2ml

ABHD14B  水解結(jié)構(gòu)域蛋白14B抗體規(guī)格: 0.2ml

ABHD15  水解結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體規(guī)格: 0.2ml

ABHD3  肺α/β水解蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml

ABHD4  α/β水解4抗體規(guī)格: 0.2ml

ACBD4  ?；o結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體規(guī)格: 0.2ml

ADCK1  ADCK1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

ADCK2  ADCK2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。