當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TP53人P53ELISA試劑盒實驗原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | P53人P53ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human p53/tumor protein, p53/TP53 Elisa Kit |
貨號 | FS-H63395 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
Shiraia sp. 竹黃(斜面)Shiraia sp.分離基物:麥葉圍微生物斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25-28℃,好氧存儲條件:定期移植法 純度:>99%
Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 膠孢(斜面)Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物:棗樹斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:25℃,好氧存儲條件:定期移植法 純度:97%
Vibrio│alginolyticus (Miyamoto et al) Sakazaki 溶藻弧菌Vibrio│alginolyticus (Miyamoto et al) Sakazaki分離基物:木欖根際土壤斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no33生長條件:28存儲條件:定期移植法 純度:97%
Alrnaria alrnata 鏈格孢菌(斜面)Alrnaria alrnata分離基物:非洲菊花瓣斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:25℃,好氧存儲條件:定期移植法 純度:98%
Microdiplodia│miyakei Sacc. 微殼色單隔胞菌Microdiplodia│miyakei Sacc.分離基物:楊樹葉片斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no植物病原物,用于該菌種群遺傳學(xué)研究14生長條件:25存儲條件:定期移植法 純度:98%
Paecilomyces farinosus (Holmsk.) A.H.S. Br. & G. Sm. 擬青霉(斜面)Paecilomyces farinosus (Holmsk.) A.H.S. Br. & G. Sm.分離基物:幼蟲斜面培養(yǎng)物模式菌株:no綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:25℃,好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:98%
Lepista sordida (Schumach.) Singer 紫花臉Lepista sordida (Schumach.) Singer斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25-28℃,好氧存儲條件:定期移植法 純度:98%
Sparassis crispa (Wulfen) Fr. 繡球菌Sparassis crispa (Wulfen) Fr.分離基物:子實體斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:28℃,好氧存儲條件:定期移植法 純度:98%
P53人P53ELISA試劑盒實驗原理CAP2 環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體磷苯啉4-氨基-3-乙基苯甲Human CXCL16 (Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16) ELISA Kit
CTn1 心肌肌鈣蛋白抗體米諾地爾4-氨基-3-乙基苯甲Human Cys-C (Cystatin C) ELISA Kit
CT-1/CTF1 心肌營養(yǎng)素1抗體羥甲三溴砜Human Cyt-C (Cytochrome C) ELISA Kit
CA I 碳酐酶1抗體十一睪1,2,3,4-丁烷四羧Human DKK1 (Dickkopf Related Protein 1) ELISA Kit
CTNNAL1 粘附分子相關(guān)蛋白a1抗體石杉甲1,2,3,4-丁烷四羧Human DPP4 (Dipeptidyl Peptidase IV) ELISA Kit
CA II 碳酐酶2抗體雙嘧達莫1,2,3,4-丁烷四羧Human EGF (Epidermal Growth Factor) ELISA Kit
/CSE1 凋亡敏感性基因魚腥草素鈉Enzastaurin (LY317615)Human EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) ELISA Kit
Phospho-Cas (Tyr165) 磷化凋亡敏感性基因維生素B122-[2-(二甲基氨基)乙氧基]乙Human EG-VEGF (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor)ELISA Kit
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