細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠單核巨噬細胞    

產(chǎn)品英文：J774A.1

貨號：FS-01X9665

細胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒Human soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit

人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒Human Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA Kit

人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit

人干擾誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒Human interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit

人巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒Human macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit

人結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒Human connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit

人B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒 Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor,BAFF-R ELISA Kit

人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit

人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA試劑盒Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit

人血管內(nèi)皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D ELISA Kit

人血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C ELISA Kit

人可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)ELISA試劑盒 Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA Kit

人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 4,TRAIL-R4 ELISA Kit

人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA Kit

人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1,TRAIL-R1 ELISA Kit

人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA Kit

人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-ⅠELISA Kit

人基質(zhì)細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒 Human Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit

人干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA Kit
小鼠單核巨噬細胞Adducin protein  內(nèi)收蛋白抗體 0.1ml

phospho-c-Jun(Thr91+Thr93)  磷化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml

Gibberellins  抗赤霉抗體 0.1ml

phospho-AQP2(Ser264/261)  磷化水通道蛋白2抗體 0.1ml

Mycobacterium bovis  牛結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體 0.2ml

CK12/Cytokeratin 12  細胞角蛋白12抗體 0.2ml

HE4/Epididymal secretory protein E4  附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml

Beta galactosidase  β半乳糖抗體 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。