Flt3抑制劑(Quizartinib)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10387

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Flt3抑制劑(Quizartinib)

英文名稱：Quizartinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

貨號(hào)：FS-X10387

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Quizartinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

Quizartinib是一種有效的選擇性的Flt3抑制劑，體外生化實(shí)驗(yàn)中，Kd(FLT3親和力檢測(cè)實(shí)驗(yàn))為1.6±0.7nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：950769-58-1

別名：AC220

純度：99.46%

分子量：560.67

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

白乳菇核蛋白p8抗體Human CD56(Neural Cell Adhesion Molecule) 桿狀病IAP重復(fù)包含蛋白2/3(BIRC2/3)

柔嫩艾美耳球蟲(chóng)神經(jīng)內(nèi)分泌特異性蛋白2抗體Human CD40L(Cluster of Differentiation 40 Ligand) 肝脂(HL)

蘇云金芽孢桿菌還原型輔Ⅱ氧化5/煙酰腺二核磷抗體Human CCL15(C-C motif chemokine 15) 肝臟型脂肪結(jié)合蛋白(L-FABP)

季也蒙假絲酵母核干因子抗體(鳥(niǎo)核結(jié)合蛋白3)Human CCL16(Chemokine C-C-Motif Ligand 16) 肝臟甘油三脂脂肪(HTGL)

滅酵母尼曼匹克C1前體蛋白抗體Human PRB4(Basic Salivary Proline Rich Protein 4) 肝型脂肪結(jié)合蛋白(L-FABP)

四脊裸胞殼去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)體抗體Human CCL18(C-C motif chemokine 18) 肝生長(zhǎng)因子激活物(HGFA)

鏈桿菌核孔復(fù)合體蛋白88抗體Human CCL17(C-C motif chemokine 17) 肝生長(zhǎng)因子(HGF)

釀酒酵母核仁蛋白8抗體Human CCL23(C-C motif chemokine 23) 肝核因子1β(HNF-1B)

炭黑曲霉NCK銜接蛋白2抗體Human CCL27(C-C motif chemokine 27) 肝結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)

蜜蜂類芽胞桿菌腎小球裂孔膜蛋白PDCN抗體Human CCL24(C-C motif chemokine 24) 肝結(jié)合EGF樣生長(zhǎng)因子(HBEGF)

膜醭畢赤酵母豆蔻?；D(zhuǎn)移1抗體Human ALCAM(CD166 antigen) 肝輔因子Ⅱ(HCⅡ)

微球菌利鈉肽受體A抗體Human CCL4(C-C motif chemokine 4) 肝癌抗原(PHC)

橄欖色盤多毛孢神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3抗體Human CCL25(C-C motif chemokine 25) 肝X受體β(LXRβ)

腐皮鐮孢神經(jīng)前體表達(dá)蛋白1抗體Human CCL7(C-C motif chemokine 7) 肝X受體α(LXRα)

大腸埃希氏菌絲/蘇蛋白激NEK1抗體Human CTSD(Cathepsin D) 甘油三酯(TG)

香菇N-乙酰轉(zhuǎn)移8樣蛋白抗體Human CTSS(Cathepsin S) 甘油-3-磷脫氫(GAPDH/G3PDH)

海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質(zhì)量規(guī)格：>90%,分子生物學(xué)級(jí)

硫色曲霉Aspergillus│sulphureus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

土曲霉Aspergillus│terreus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
Flt3抑制劑(Quizartinib)鏈格孢 4,5,6,7-四氫噻吩并[3.2-c]吡啶組織激肽釋放

哈茨木霉 2--3-甲氧基苯甲組織型谷氨酰轉(zhuǎn)移

滑菇、光帽黃傘 2-喹喔啉甲酰組織型纖溶原激活劑

橙色綠屈擾 2-甲基-4-硝基氧化吡啶組織因子

猴頭 2--3-溴-5-硝基吡啶組織因子途徑抑制物

硬水黃桿 3-氨基噠胰島樣生長(zhǎng)因子抗體

白色腥擲孢 (+/-)-β-羥基-中間α球蛋白抑制因子H3

副豬嗜血桿醋鋰載脂蛋白C4

水生哈薩克斯坦酵母 2-氨基苯乙酮鹽鹽纖維蛋白原β

土生類諾卡氏四乙鉛BELSA

頂生腐霉 3-巰基乙酯ELRIR

東方假單胞 4'--3'-乙酮白介6抗體

釀酒酵母基硅烷基乙炔鋰第八因子相關(guān)抗原

薄層 N-叔丁氧羰基-N'-(2-芐氧羰基)-L-賴磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激2

吐魯番考克氏 D-烯基甘C-Raf原癌基因絲蘇蛋白激
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)