細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：支氣管上皮細(xì)胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9765

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人胸腺嘧啶核磷化(TP)ELISA試劑盒英文名稱：Human thymidinephosphorylase,TP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人多聚ADP核糖聚合(PARP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Poly ADP ribose polymerase,PARP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人葡萄糖激(GCK)ELISA試劑盒英文名稱：Human glucokinase,GCK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人單氧化(MAO)ELISA試劑盒英文名稱：Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人胞漿型磷脂A2(cPLA2)ELISA試劑盒英文名稱：Human cytosolic phospholipase A2,cPLA2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人二氧化(DAO)ELISA試劑盒英文名稱：Human diamine oxidase,DAO ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人環(huán)加氧2(COX-2)ELISA試劑盒英文名稱：Human cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人周期依賴性激5(CDK5)ELISA試劑盒英文名稱：Human Cyclin Dependent Kinase 5,CDK5 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人激釋放10(KLK 10)ELISA試劑盒英文名稱：Human Kallikrein 10,KLK 10 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人磷酯Cγ鏈(PLCγ1)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Phospholipase Cγ1,PLCγ1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人神經(jīng)(NA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human neuraminidase,NA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人磷酯酰肌特異性磷酯C(PIPLC)ELISA試劑盒 英文名稱：Human phosphoinositide-specific phospholipase C,PIPLC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人酪激2(Tyk-2)ELISA試劑盒 英文名稱：Human tyrosine kinase2,Tyk-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人白介1β轉(zhuǎn)換(ICE)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Interleukin 1β converting enzyme,ICE ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人整合連接激1(ILK-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Human integrin-linked kinase 1,ILK-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人細(xì)胞色P450c21B/21-羥化(CYP21B)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase,CYP21B ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人細(xì)胞色P450c21A/21-羥化(CYP21A)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase,CYP21A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人末端脫氧核轉(zhuǎn)移(TdT)ELISA試劑盒 英文名稱：Human terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
支氣管上皮細(xì)胞AP2 gamma  轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體規(guī)格: 0.1ml

P45017A1/Cytochrome P450 17A1   P450 17A1抗體規(guī)格: 0.1ml

TRPV2/VRL1  辣椒受體樣蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

DICER1/Dicer  核糖核Dicer抗體規(guī)格: 0.1ml

Cullin 4B  CUL4B蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

TIAM1  T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

SRD5A2  類固5α還原2抗體規(guī)格: 0.1ml

ANAPC1  細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體規(guī)格: 0.1ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。