細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號(hào)：FS-01X9872

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒英文名稱：Chicken Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞白介1β(IL-1β)ELISA試劑盒英文名稱：Chicken Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞主要組織相容性復(fù)合體(MHC/B)ELISA試劑盒英文名稱：Chicken major histocompatibility complex,MHC/B ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Heat Shock Protein 70,Hsp-70 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞白痢抗體檢測(cè)(PD)ELISA試劑盒 英文名稱：Chiken Pullorum Diseaes,PD ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒英文名稱：Chicken secretory immunoglobulin A,SIgA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞α干擾(IFN-α)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Interferon α,IFN-α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞白介18(IL-18)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Interleukin 18,IL-18 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞白介1(IL-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken virus enteritis,DEV ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

雞肌紅蛋白(MYO/MB) ELISA試劑盒英文名稱：Chicken Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞白介9(IL-9)ELISA試劑盒英文名稱：Chicken Interleukin 9,IL-9 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞白介3(IL-3)ELISA試劑盒英文名稱：Chicken Interleukin 3,IL-3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Transforming Growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

雞免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒 英文名稱：Chicken Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞phospho-FRS2(Tyr436)  磷化成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體底物2抗體規(guī)格: 0.1ml

ASP/AKAP associated Sperm Protein  相關(guān)蛋白AKAP抗體規(guī)格: 0.2ml

AKAP6  蛋白激A錨定蛋白6抗體規(guī)格: 0.2ml

BRSK1  /蛋白激SAD-B抗體規(guī)格: 0.2ml

CERK  神經(jīng)酰激CERK抗體規(guī)格: 0.2ml

CLK2  細(xì)胞分裂周期樣激2抗體規(guī)格: 0.2ml

CLK3  細(xì)胞分裂周期樣激3抗體規(guī)格: 0.2ml

phospho-CK II beta(Ser209)  磷化/蛋白激II β(casein kinase IIβ)抗體規(guī)格: 0.1ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。