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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9763 |
產(chǎn)品屬于:
產(chǎn)品名稱:氣管上皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格:5×105
貨號:FS-01X9763
產(chǎn)品類型:原代細胞
單位:T25/瓶
提供細胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人核磷化1(UPP1)ELISA試劑盒英文名稱:human uridine phosphorylase 1,UPP1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人乙脫氫(ADH)ELISA試劑盒英文名稱:Human alcohol dehydrogenase,ADH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人乙醛脫氫(ALDH)ELISA試劑盒英文名稱:Human aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人Rho家族GTP1(RND1)ELISA試劑盒英文名稱:human Rho family GTPase 1,RND1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人受體TNFRSF結合絲蘇激2(RIPK2)ELISA試劑盒英文名稱:human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2,RIPK2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人磷脂爬行1(PLSCR1)ELISA試劑盒英文名稱:human phospholipid scramblase 1,PLSCR1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人3-羥基-3-甲基戊二酰輔A合1(HMGCS1)ELISA試劑盒英文名稱:human 3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A synthase 1,HMGCS1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人嗜性白血球相關之RNA水解酵家族成員12(EAR12)ELISA試劑盒英文名稱:human eosinophil-associated ribonuclease A family member 12,EAR12 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人嗜性白血球相關之RNA水解酵家族成員3(EAR3)ELISA試劑盒英文名稱:human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3,EAR3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人嗜性白血球相關之RNA水解酵家族成員2(EAR2)ELISA試劑盒英文名稱:human eosinophil-associated ribonuclease A family member 2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人二氫嘧啶樣3(DPYSL3)ELISA試劑盒英文名稱:human dihydropyrimidinase-like 3,DPYSL3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人色酰tRNA合成(WARS)ELISA試劑盒英文名稱:human tryptophanyl-tRNA synthetase,WARS ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人己糖激3(HK3)ELISA試劑盒英文名稱:human hexokinase 3,HK3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人血小板型磷果糖激(PFKP)ELISA試劑盒英文名稱:human phosphofructokinase-platelet,PFKP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人尿二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)ELISA試劑盒英文名稱:human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人凋亡相關半胱4(Casp4)ELISA試劑盒英文名稱:human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人吡哆醛/吡哆維生B6激(PDXK)ELISA試劑盒英文名稱:human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)ELISA試劑盒英文名稱:human dihydropyrimidinase-like 2,DPYSL2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
氣管上皮細胞VMAT1/VAT1 嗜鉻顆粒轉(zhuǎn)運蛋白VAT1抗體規(guī)格: 0.1ml
M Cadherin M鈣粘附分子抗體規(guī)格: 0.1ml
MAOA 單氧化A抗體規(guī)格: 0.1ml
MEIS1 同源盒蛋白Meis1抗體規(guī)格: 0.1ml
BNIP1/TRG8 Bcl2相互作用蛋白1抗體(轉(zhuǎn)化相關基因8蛋白)規(guī)格: 0.1ml
BNIP2 Bcl2相互作用蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml
CLDND1 膜蛋白CLDND1抗體規(guī)格: 0.1ml
SCN11A/NAV1.9 鈉通道蛋白11α抗體規(guī)格: 0.2ml
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