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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96TRTKs人受體酪氨酸激酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
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公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | RTKs人受體酪氨酸激酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human receptor tyrosine kinase, RTKs Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63916 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)
雙環(huán)己草酰二腙別名: 新銅試劑英文名稱: Cuprizon: 370-81-0分子式: C14H22N4O2
環(huán)己甲別名: 環(huán)己基甲;六氫甲;六氫化甲;氫化甲;環(huán)已羧;環(huán)己甲;環(huán)己烷羧;環(huán)己基甲,98%;CyclohexanecarboxylicAcid;HexahydrobenzoicAcid;Fema3531;AkosBbs-00003723;RarechemALBO1301;Timc-BBSbb008550;BenzoicAcid,Hexahydro-;Carboxy英文名稱: Cyclohexanecarboxylic Acid: 98-89-5分子式: C7H12O2
芐基三乙基溴化銨(BA)別名: 芐基三乙基溴化銨英文名稱: Benzyl triethyl ammonium bromide: 5197-95-5分子式: C13H22NBr
4,8-二羥基喹啉-2-甲別名: 4,8-二羥基喹啉-2-羧英文名稱: Xanthurenic acid: 59-00-7分子式: C10H7NO4
二甲基二烯丙基化銨別名: 二甲基二烯丙基化銨;二烯丙基二甲基化銨英文名稱: Diallyldimethylammonium chloride solution: 7398-69-8分子式: C8H16ClN
鹽芐絲肼別名: 鹽芐絲肼;2'-(2,3,4-trihydroxybenzyl)-dl-serinohydrazidemonohydrochloride英文名稱: Benserazide hydrochloride: 14919-77-8分子式: C10H16ClN3O5
3-(3,4-二羥基基)丙英文名稱: 3-(3,4-Dihydroxyphenyl)Propionic Acid: 1078-61-1分子式: C9H10O4分子量: 182.18
3,5-二氨基甲別名: 3,5-二氨基安息香;3,5-二氨基;3,5-二胺甲;間二氨基甲英文名稱: 3,5-Diaminobenzoic acid: 535-87-5分子式: C7H8N2O2
RTKs人受體酪氨酸激酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 Phospho-BAP1 (p-Ser592)(human) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人磷化癌易感基因1抗體(人)IgGRho GTP酶激活蛋白32抗體5-羥基-1-四氫萘Mouse RPL26 (Ribosomal Protein L26) ELISA Kit
Bassoon/BSN /FITC 熒光素標(biāo)記鋅指蛋白231抗體IgG能量平衡相關(guān)蛋白抗體(3S)-3-(芴甲氧羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊Mouse RNF4 (Ring Finger Protein 4) ELISA Kit
Batroxobin/FITC 熒光素標(biāo)記蛇******巴***曲***酶***抗***體IgG禽腦脊髓炎病AEV抗體2-溴-9,9-二甲基芴Mouse RUNX2 (Runt Related Tranion Factor 2) ELISA Kit
Bax protein/FITC 熒光素標(biāo)記 Bax 蛋白抗體IgG腺苷環(huán)化酶7抗體2-溴-9,9-二甲基芴Mouse S100A11 (S100 Calcium Binding Protein A11) ELISA Kit
Bax/FITC 熒光素標(biāo)記Bax抗體IgG腺苷環(huán)化酶4抗體11-溴十一Mouse S100A7 (S100 Calcium Binding Protein A7) ELISA Kit
Bax(phospho Ser184) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、鼠等磷化Bax抗體IgG腺苷活化蛋白激酶γ1抗體11-溴十一Mouse S100B (S100 Calcium Binding Protein B) ELISA Kit
BBC3/PUMA /FITC 熒光素標(biāo)記p53正向凋亡調(diào)控因子抗體IgG芳香胺N-乙酰化轉(zhuǎn)移酶抗體11-溴十一Mouse S100A6 (S100 Calcium Binding Protein A6) ELISA Kit
BCHE/FITC 熒光素標(biāo)記丁酰膽脂酶抗體(N端)IgG腺苷環(huán)化酶8抗體二酐Mouse S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit
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