細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：小鼠淋巴瘤細胞    

產品英文：EL-4

貨號：FS-01X9659

細胞培養(yǎng)條件：DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%馬血清(或FBS)+1%P/S

生長狀態(tài)：懸浮生長

產品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人血清淀粉樣蛋白P(SAP)ELISA試劑盒 Human Serum amyloid P，SAP ELISA Kit

人活化蛋白C(APC) ELISA試劑盒Human activated protein C，APC ELISA Kit

人蛋白C(Protein C)ELISA試劑盒Human Protein C ELISA Kit

人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒Human platelet factor 3， PF3 ELISA Kit

人原片段F1+2(F1+2)ELISAHuman prothrombin fragment 1+2，F1+2 ELISA Kit

人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒 Human Hemoglobin C，HbC ELISA Kit

人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒 Human Fibrin ELISA Kit

人血纖/纖維蛋白B(FPB)ELISA試劑盒 Human fibrinopeptide B，FPB ELISA Kit

人纖溶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒 Human plasminogen activator，PLGA ELISA Kit

人細胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒 Human Surface Membrane Immunoglobulin，SmIg ELISA Kit

人前白蛋白(PA)ELISA試劑盒 Human prealbumin，PA ELISA Kit

人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒Human leukocyte antigen G，HLA-G ELISA Kit

人補體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒Human Complement fragment 3b，C3b ELISA Kit

人游離蛋白S(FP-S)ELISA試劑盒Human Free Protein S，FP-S ELISA Kit

人纖溶原(Plg)ELISA試劑盒 Human Plasminogen，Plg ELISA Kit

人血清白蛋白(HSA)ELISA試劑盒Human sreum albumin，HSA ELISA Kit

人血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 Human thrombospondin 1，TSP-1 ELISA Kit

人補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒Human Complement 4，C4 ELISA Kit

人補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒 Human Complement 3，C3 ELISA Kit
小鼠淋巴瘤細胞phospho-SYT1(Thr202)  磷化突觸結合蛋白1抗體 0.1ml

Synaptotagmin 1/SYT1  突觸結合蛋白1抗體 0.2ml

phospho-SYT1(Ser309)  磷化突觸結合蛋白1抗體 0.1ml

phospho-SYN1(Ser549)  磷化神經突觸1抗體 0.1ml

phospho-SYN1(Ser603)   磷化神經突觸1抗體 0.1ml

phospho-SYN1(Ser62+Ser67)  磷化神經突觸1抗體 0.1ml

AD7c-NTP  神經絲蛋白抗體 0.2ml

ADAMTS2  整合樣金屬蛋白與2型抗體 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。