當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96Tcath-D人組織蛋白酶DELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
IL-2R人白介素2受體ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
PCDH1人原鈣黏素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
LTA人淋巴毒素αELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
ALDH人乙醛脫氫酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
FⅫ人凝血因子ⅫELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | cath-D人組織蛋白酶DELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human cathepsin D, cath-D Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63908 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
十二烷二別名: 十二烷二;正十二烷二元,月桂二,十二碳二,十二雙,十二碳二元,1,10-癸二英文名稱: Dodecanedioic acid: 693-23-2分子式: C12H22O4
雙十八烷基二甲基溴化銨別名: 二甲基二十八烷基溴化銨;雙十八烷基二甲基溴化銨;溴化雙十八烷基二甲基銨;二甲基二硬脂胺溴化物;二甲基二(十八烷基)溴化銨,99%;Dda英文名稱: Dimethyldioctadecylammonium bromide: 3700-67-2分子式: C38H80BrN
唑沙宗有效期: 復(fù)檢期2年溶解性: 50mg/ml DMSO英文名稱: 5-Chloro-2-Benzoxazolinoone: 95-25-0
頭孢呋辛鈉英文名稱: Cefuroxime sodium: 56238-63-2單位: 瓶貨期: 2-3天
溴鄰三酚紅別名: 溴鄰三酚紅;溴焦性沒食子紅,溴連三酚紅,二溴鄰三酚磺酞,二溴鄰三酚磺酞,溴焦桔紅,二溴連三酚磺酞英文名稱: Bromopyrogallol red: 16574-43-9分子式: C19H10Br2O8S
乙酰胺有效期: 3年級(jí)別: AR溶解性: 50 mg/mlWar來源: 合成
6-(二甲基氨基)嘌呤有效期: 2年英文名稱: N6,N6-Dimethyladenine: 938-55-6分子式: C7H9N5
鄰二甲二辛酯別名: 鄰二二辛酯;鄰二二異辛酯;鄰二甲二(2-乙基已)酯;增塑劑;二甲二(異)辛酯;二辛基酞酯;鄰二甲二(α-乙基己)酯;鄰酞二辛酯;酞雙(2-乙基己基)酯;鄰二甲二辛酯;鄰二甲二異辛酯;二甲二辛酯;鄰酞二正辛酯英文名稱: Bis(2-ethylhexyl) phthala: 117-81-7分子式: C24H38O4
cath-D人組織蛋白酶DELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理ATF6/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體IgG磷化乙酰輔酶A羧化酶抗體二乙基膦?;沂宥□ouse PDIA3 (Protein Disulfide Isomerase A3) ELISA Kit ATG1/ULK1/FITC 熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白1抗體IgG磷化乙酰輔酶A羧化酶抗體5-羥基煙Mouse PDI (Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit
ATG7/FITC 熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白7抗體IgG磷化腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體5-羥基煙Mouse PIAS1 (Protein Inhibitor Of Activated STAT 1) ELISA Kit
thrombin II /FITC 熒光素標(biāo)記凝血酶Ⅱ抗體IgG磷化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體5-羥基煙Mouse PICK1 (Protein Interacting With Protein Kinase C, Alpha 1) ELISA Kit
ATH III /FITC 熒光素標(biāo)記抗凝血酶Ⅲ抗體IgG磷化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體1,12-二氨基十二烷Mouse PKBg (Protein Kinase B Gamma) ELISA Kit
ATM/FITC 熒光素標(biāo)記毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體IgG磷化乙酰輔酶A羧化酶抗體1,12-二氨基十二烷Mouse PKB (Protein Kinase B) ELISA Kit
Phospho-PAK4 (Ser99)/FITC 熒光素標(biāo)記磷化p21激活激酶4抗體IgG膜粘連蛋白6抗體四鋅水合物Mouse PKCb1 (Protein Kinase C Beta 1) ELISA Kit
ATP2c1/Ca++ ATPase/FITC 熒光素標(biāo)記鈣離子ATP酶通道蛋白抗體IgG錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體CBZ-L-賴氨甲酯鹽鹽Mouse PKCd (Protein Kinase C Delta) ELISA Kit
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