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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號 | AXB6440 | 規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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產(chǎn)品名稱 | MCAS人卵巢癌細(xì)胞 | 貨號 | AXB6440 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | MCAS |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項:
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候,這時細(xì)胞生長狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時,再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因為這樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Ai-Mitofilin/IMMT /FITC 熒光素標(biāo)記線粒體內(nèi)膜蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-TRA16 /FITC 熒光素標(biāo)記激素受體相關(guān)蛋白/孤兒素受體相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ABI3BP ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Ai-Avidin/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml
Phospho-Gab1 (Tyr659) 英文名稱: 0酸化接頭蛋白Gab 1抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Rabbit Ai-Avidin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml
Ai-TRA16 /FITC 熒光素標(biāo)記激素受體相關(guān)蛋白/孤兒素受體相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-MK(Midkine) 熒光素標(biāo)記中期因子/肝素結(jié)合生長因子抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-TRADD/FITC 熒光素標(biāo)記有死亡區(qū)的壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ABI3 ABI基因家族2抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Ai-Avidin/PE PE標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml
Phospho-Gab1 (Tyr627) 英文名稱: 0酸化接頭蛋白Gab 1抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Rabbit Ai-Avidin/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml
Ai-TRADD/FITC 熒光素標(biāo)記有死亡區(qū)的壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-HIV-1 ENV (gp160) aigen/FITC 熒光素標(biāo)記艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai--phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) /FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ATG4D 自噬相關(guān)蛋白4D抗體 規(guī)格 0.2ml
A Beta1-40 (mutation type, MT) peptide 突變型β淀粉樣肽1-40 0.1mg
phospho-G3BP1(Ser232) 英文名稱: 0酸化Ras GTP酶活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
MCAS人卵巢癌細(xì)胞Rhesus aibody Rh Rabbit Ai-mouse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Ai--phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) /FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-NPY1R/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)肽Y1受體抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-HAS/FITC 熒光素標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
CD10抗體 Ai-CD10/CALLA 0.1ml
Goat Ai-rat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
phospho-FXYD1 (Ser88) 英文名稱: 0酸化0酸神經(jīng)膜抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh PMS1 錯配修復(fù)基因PMS1抗體 規(guī)格 0.2ml
Ai-HAS/FITC 熒光素標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗證敲減/過表達(dá)效率。
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