細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠腎小球系膜細(xì)胞    

產(chǎn)品英文：HBZY-1

貨號(hào)：FS-01X9713

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Helicobacter pylori IgG ，Hp-IgG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人γ谷酰轉(zhuǎn)移(GGT) ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human gamma glutamyl transpeptidase，GGT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人胃粘液(GM)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Gastric Mucin，GM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人Ⅰ型膠原N末端(NTX)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen，NTX ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人幽門(mén)螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Human Helicobacter pylori IgM，Hp-IgM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人胃抑(GIP)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Human gastric inhibitory polypeptide，GIP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Collagen-like Bioprotein Ⅱ，HCBⅡ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人多YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Peptide YY ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人促胃液受體(GsaR)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human gastrin receptor，GsaR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人膽囊收縮/縮膽囊八(CCK-8)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human cholecystokinin octapeptide，CCK-8 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人α1性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human α1-Acid glycoprotein，α1-AGP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人丙二醛(MDA)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human malondialchehyche，MDA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人膽囊收縮/腸促胰(CCK)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human cholecystokinin，CCK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人Ⅲ型前膠原(PⅢNP)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human N-terminal procollagen Ⅲ propeptide，PⅢNP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Collagen Type Ⅱ，Col Ⅱ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Collagen Type Ⅰ，Col Ⅰ ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人Ⅰ型前膠原羧基端(PⅠCP)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human procollagen Ⅲ N-terminal peptide，PⅢNT ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人透明質(zhì)(HA)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Hyaluronic acid，HA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠腎小球系膜細(xì)胞AF10/MLLT10  髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-BCAR1(Tyr410)  磷化乳腺癌抗雌耐藥蛋白1規(guī)格: 0.1ml

CAMK1D  鈣調(diào)蛋白激CaMK1D抗體規(guī)格: 0.2ml

DDX43/CT13  腫瘤/睪丸抗原13抗體規(guī)格: 0.2ml

GIG22/DNAJC15  細(xì)胞生長(zhǎng)抑制蛋白22抗體（甲基化控制J蛋白）規(guī)格: 0.2ml

NRG1/HRG beta 1  乳腺癌細(xì)胞分化因子P45抗體 Heregulinβ規(guī)格: 0.1ml

ID3  DNA結(jié)合抑制因子3抗體規(guī)格: 0.2ml

LC3C  微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。