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貨號(hào) | FS-X10764 |
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中文名稱:MEK小分子抑制劑(CI-1040)
英文名稱:CI-1040
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10764
產(chǎn)品介紹:
CI-1040(PD184352)是高度特異的MEK小分子抑制劑,對(duì)MEK1的IC50值為17nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):212631-79-3 別名:PD 184352 純度:99.72% 分子量:478.66 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
新月彎孢Anti-HNRNPA0 pAb人抗肌動(dòng)蛋白抗體(AAA)
長孢鏈霉菌Anti-hnRNP L Antibody人抗肌動(dòng)蛋白抗體(AAA)
黃絮鱗鵝膏菌Anti-HNRNPD Antibody人抗肝PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)
運(yùn)動(dòng)替斯崔納菌Anti-HNRNPC Antibody人抗肝PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)
水棲黃桿菌Anti-HNRNPD Antibody人蛋白3抗體(PR3Ab)
檸檬色短小桿菌Anti-HNRNPD(AUF1) pAb人蛋白3抗體(PR3Ab)
葡萄座腔菌Anti-HNRNPM Antibody人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)
緣彎孢Anti-HNRNPH1 Antibody人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)
木糖氧化無色桿菌Alexa Fluor 350標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-HNRNPH2 Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG
牛病性腹瀉病熒光Cy3標(biāo)記兔抗FITCAnti-HNRNPLL Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG
異常漢遜酵母熒光PE-Cy3標(biāo)記小鼠IgG(流式同型對(duì)照)Anti-HORMAD1 Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG
枯草芽孢桿菌熒光PE-Cy3標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)Anti-HNRNPUL2 Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG
球形芽胞桿菌熒光Cy3標(biāo)記羊抗人IgAAnti-HNRNPUL2 Antibody人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)
多主葡萄殼菌Alexa Fluor 350標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)Anti-HOXA7 Antibody人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)
土曲霉Alexa Fluor 350標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對(duì)照)Anti-HNRPLL Antibody人抗糖蛋白抗體(GP)
伊氏利斯特氏菌生物標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HOXB1 Antibody人抗糖蛋白抗體(GP)
PSD95結(jié)合蛋白2抗體產(chǎn)黃青霉人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞
PSD95結(jié)合蛋白4抗體阿達(dá)青霉人胰腺癌細(xì)胞系
SCK蛋白抗體棉鈴蟲擬青霉大鼠甲狀腺細(xì)胞
神經(jīng)組織特異性F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白2抗體玫煙色擬青霉彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
MEK小分子抑制劑(CI-1040)韋斯特迪克氏曲霉 RV肉湯雌二
腐爛粘束梗霉 瓊脂培養(yǎng)基N(溴化十六烷基三瓊脂)黃體生成
樟疫霉 溴化十六烷基三瓊脂孕酮
球孢白僵 檢定培養(yǎng)基1號(hào)(高PH)促卵泡
產(chǎn)氨短桿 D-阿洛糖雌二
弓形蟲(RH株) 支原體瓊脂培養(yǎng)基睪酮
新城疫病 麥康凱肉湯催乳
長柄條孢牛肝 BBL液體培養(yǎng)基乳糖
黑曲霉 GN糜蛋白
大腸埃希氏 1-甲酰胰蛋白
香菇 蛋白胨緩沖液顆粒酪蛋白αs1
木耳屬 MLCB寒天培地顆粒酪蛋白β
丁香假單胞 瓊脂培養(yǎng)基F(紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂)κ酪蛋白
構(gòu)巢曲霉 腸道富集肉湯培養(yǎng)基(USP)雌
靈芝屬 (S)-(+)-1-苯基-1,2-乙二促腎上腺皮質(zhì)
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