細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞    

產(chǎn)品英文：C6

貨號(hào)：FS-01X9704

細(xì)胞培養(yǎng)條件：F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)ELISA試劑盒Human lumican,LUM ELISA Kit

人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒Human Na+/H+ exchanger 3,NHE3 ELISA Kit

人孤腓(OFQ/N)ELISA試劑盒Human orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit

人基質(zhì)裂解(ST1)ELISA試劑盒 Human Stromelysin-1,ST1 ELISA Kit

人基質(zhì)裂解(ST2)ELISA試劑盒 Human Stromelysin-2,ST2 ELISA Kit

人基質(zhì)裂解(ST3)ELISA試劑盒 Human Stromelysin-3,ST3 ELISA Kit

人脂氧A4(LXA4)ELISA試劑盒 Human Lipoxin A4,LXA4 ELISA Kit

人蛋白3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒Human proteinase-antineutrophil cytoplasmic antibody,PR3-ANCA ELISA Kit

人β-促脂(β-LPH)ELISA試劑盒 Human β-lipotropic hormone,β-LPH ELISA Kit

人脂磷壁(LTA)ELISA試劑盒 Human lipoteichoic acids,LTA ELISA Kit

人乙碘呋(AD)ELISA試劑盒 Human amiodarone,AD ELISA Kit

人唾液(SA)ELISA試劑盒 Human Sialic acid,SA ELISA Kit

人鞘磷脂(SM)ELISA試劑盒 Human sphingomyelin,SM ELISA Kit

人尿游離皮質(zhì)(UFC)ELISA試劑盒 Human urinary free cortisol,UFC ELISA Kit

人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試劑盒 Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody,ASCA ELISA Kit

人遲現(xiàn)抗原4(VLA4)ELISA試劑盒 Human very late appearing antigen 4,VLA4 ELISA Kit

人吖啶橙(AO)ELISA試劑盒Human Acrine Orange,AO ELISA Kit

人甲喋呤(MTX)ELISA試劑盒 Human methotrexate,MTX ELISA Kit

人對(duì)基苯甲(PABA)ELISA試劑盒 Human para-aminobenzoic acid,PABA ELISA Kit
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞p53 DINP1  p53誘導(dǎo)核蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

p73 alpha  p53相關(guān)蛋白P73α抗體規(guī)格: 0.2ml

Frizzled 1/Wnt receptor  Wnt信號(hào)受體蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

GNAT3  G蛋白轉(zhuǎn)錄因子α3抗體規(guī)格: 0.2ml

GPR124  G蛋白偶聯(lián)受體124抗體（腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記物）規(guī)格: 0.2ml

GPR172B  G蛋白偶聯(lián)受體172B抗體規(guī)格: 0.2ml

GNAQ/Gα q  G蛋白α亞單位蛋白Q抗體規(guī)格: 0.2ml

RAP1GDS1  G蛋白GTP-GDP解離刺激因子1抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。