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產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	是
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	FS-01X9788

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：頸動(dòng)脈成纖維細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號(hào)：FS-01X9788

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：

1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。

3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

人血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒英文名稱：Human Fibrinogen,Fbg ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒英文名稱：Human major histocompatibility complex Ⅰ,MHCⅠ/HLAⅠ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒英文名稱：Human thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒英文名稱：Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒英文名稱：Human major histocompatibility complex Ⅲ,MHCⅢ/HLA-Ⅲ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱：Human major histocompatibility complex Ⅱ,MHCⅡ/HLA-Ⅱ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒英文名稱：Human β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒英文名稱：Human Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒英文名稱：Human lymphocyte function associated antigen 2,LFA-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒英文名稱：Human Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人Salusin-α ELISA試劑盒英文名稱：Human Salusin α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人胰島受體底物2(IRS-2)ELISA試劑盒英文名稱：human Insulin receptor substrate 2,IRS-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)ELISA試劑盒英文名稱：Human transthyretin,TTR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)ELISA試劑盒英文名稱：Human advanced oxidation protein products,AOPP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人胰島淀粉樣多(IAPP)ELISA試劑盒英文名稱：Human islet amyloid polypeptide,IAPP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒英文名稱：Human Thyroxine-Binding Globulin Assay,TBG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒英文名稱：Human advanced glycation end products,AGEs ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
頸動(dòng)脈成纖維細(xì)胞FMRP/FMR1 脆性X智力低下蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

IFRD1 干擾相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白1抗體（神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白PC4）規(guī)格: 0.2ml

PERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-GATA-4(ser 262) 磷化GATA結(jié)合蛋白4抗體規(guī)格: 0.1ml

GPR109A/Puma gamma G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體規(guī)格: 0.2ml

SCN3B 電壓門(mén)控鈉通道SCN3B蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

TIS11D/ERF2 表皮生長(zhǎng)因子反應(yīng)蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml

xCT/CCBR1 鈣離子通道阻端耐藥蛋白CCBR1抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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