ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類(lèi)型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Gluconacetobacr│hansenii 漢氏葡糖醋桿菌Gluconacetobacr│hansenii凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noproduces 17-beta-hydroxysroid dehydrogenase produces 3-hydroxysroid dehydrogenase 3-beta-hydroxysroid dehydrogenase33生長(zhǎng)條件:26℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：99%

Lactobacillus│rossiae 羅氏乳桿菌Lactobacillus│rossiae凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noType strain33生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%

Aeromonas│punctata subsp. caviae 斑點(diǎn)氣單胞菌豚鼠亞種Aeromonas│punctata subsp. caviae凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)基:KNO3 2g;MgSO4.7H2PO 2g;K2HPO4 0.5g;鉀鈉 20g;瓊脂 20g441存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Micromonospora│peucetia 阿普利亞單孢菌Micromonospora│peucetia凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)基:NH4Cl 0.535g;KH2PO4 0.054g;KCl 0.074g;MgSO4.7H2O 0.049g;CaCl2.2H2O 0.147g;NaCl 0.584g;0.05%甲酚紅溶液 1ml;微量元素液 1ml;PH7.0-8.0，適7.8，用0.5gCaCO3或11.9gHEPES調(diào)；瓊脂 20gA4生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Aquaspirillum│arcticum 北螺菌Aquaspirillum│arcticum凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noR2A生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Sphingomonas│melonis 瓜類(lèi)鞘氨醇單胞菌Sphingomonas│melonis凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noR2A生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Leptothrix│discophora 盤(pán)狀纖發(fā)菌Leptothrix│discophora凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noR2A生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：97%

Bacillus│thuringiensis subsp. galleriae 蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種Bacillus│thuringiensis subsp. galleriae凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no2生長(zhǎng)條件:30-32℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：97%
PT人百日咳毒素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理GSK-3 Beta (CT)  葡萄糖合成激酶-3β抗體地蜈蚣N-乙酰-D-氨Human MF/MPF (Maturation Promoting Factor) ELISA Kit

phospho-GSK-3 Beta(Ser9)  磷化葡萄糖合成激酶3β抗體錦燈籠N-乙酰-D-氨Human PYGB (Glycogen Phosphorylase, Brain ) ELISA Kit

phospho-GSK-3 Beta(Thr390)  磷化葡萄糖合成激酶3β抗體藁本（藁本）N-乙酰-D-氨Human FABP7 (Fatty Acid Binding Protein 7, Brain) ELISA Kit

phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216)  磷化葡萄糖合成激酶3α/β抗體藁本（遼藁本）2(2-吡)Human MAOA (Type A Monoamine Oxidase) ELISA Kit

GSK-3 Beta (NT)  糖原合酶激酶-3β抗體薤白(根蒜）2(2-吡)Human MCP-2/CCL8 (Monocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit

GST tag  GST標(biāo)簽蛋白抗體鶴虱2(2-吡)Human MCP-4/CCL13 (Monocyte Chemotactic Protein 4) ELISA Kit

/GLUR  谷胱甘肽還原酶抗體蟾酥3-羥基苯甲甲酯Human GPER1 (G Protein Coupled Estrogen Receptor 1) ELISA Kit

GTP cyclohydrolase 1/GTP-CH-1  三磷鳥(niǎo)苷環(huán)水解酶抗體松葉3-羥基苯甲甲酯Human PRDX1 (Peroxiredoxin 1) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)