細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：纖維環(huán)細胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9859

產(chǎn)品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Transforming Growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠煙酰腺二核磷(NADPH)ELISA試劑盒英文名稱：Rat nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Neurotrophin 4,NT-4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Neurotrophin 3,NT-3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Nerve growth factor,NGF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒英文名稱：Rat macrophage inflammatory protein 3α,MIP-3α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠層連蛋白/板層(LN)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Laminin,LN ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介6(IL-6)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介4(IL-4)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介2(IL-2)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介1α(IL-1α)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Interleukin 1α ,IL-1α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介18(IL-18)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Interleukin 18,IL-18 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介10(IL-10)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠胰島樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
纖維環(huán)細胞phospho-PRKAB1(Ser182)  磷化腺單磷活化蛋白激β1抗體規(guī)格: 0.1ml

AMPK gamma 1  腺活化蛋白激γ1抗體規(guī)格: 0.2ml

KLHDC5  kelch樣蛋白5抗體規(guī)格: 0.2ml

phospho-C-Myc(Thr358)  磷化致癌基因C-Myc抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-C-Myc(Thr373)  磷化致癌基因C-Myc抗體規(guī)格: 0.1ml

KLHL22  Kelch樣蛋白22抗體規(guī)格: 0.2ml

KNTC1/Kinetochore  著絲點關(guān)聯(lián)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

AMPK gamma 3/PRKAG3  腺活化蛋白激γ3抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。