當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TEGF人表皮生長因子ELISA試劑盒實驗原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | EGF人表皮生長因子ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Epidermal growth factor, EGF Elisa Kit |
貨號 | FS-H63252 |
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結(jié)果,可提供免費技術咨詢服務!
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樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
Pachysolen tannophilus 嗜鞣管囊酵母Pachysolen tannophilus凍干物,斜面安全等級:1釀造酒精;利用戊碳糖。酵母膏 3.0g,麥芽浸膏 3.0g,蛋白胨 5.0g,葡萄糖 10.0g,瓊脂 20.0g,蒸餾 1.0L。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:24℃,好氧存儲條件:2-8℃冷藏,凍干管10年以上,斜面1-3個月。 純度:98%
Escherichia coli SC 志賀性大腸埃希氏菌Escherichia coli SC分離基物:腹瀉病例糞便標本凍干物安全等級:2模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:37℃,好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Lichtheimia│ramosa 總狀橫梗霉Lichtheimia│ramosa斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no釀造黃酒。CM0077生長條件:28-30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:97%
Corynebacrium ammoniagenes 產(chǎn)氨棒桿菌Corynebacrium ammoniagenes凍干物安全等級:1模式菌株:no研究;。發(fā)酵法三磷腺苷(ATP)。普通瓊脂:牛肉浸液 1.0L,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂20.0~25.0g,pH7.2~7.4。[注] 牛肉浸液的制備:瘦牛肉洗凈,切碎,稱取550克浸泡于1375ml中,浸泡一夜,過濾,濾液分裝后0.6kg/cm2滅菌40min后備用。生長條件:28-30℃。好氧。生長特性G+,抗染色陰性,菌體短桿狀,單個排列,兩端圓形,無芽胞,無莢膜,不運動。菌落圓形,表面光滑,稍凸起,邊緣整齊,灰白色,有光澤。培養(yǎng)液混濁,無氣味,無沉落物。不液化明膠。發(fā)酵葡萄糖、果糖和麥芽糖。葡萄糖發(fā)酵型,V.P陰性,M.R.陰性,不解淀,不分解纖維素,吲哚反應陰性,不產(chǎn)H2S,脲酶陽性,接觸酶陽性,兼性厭氧。高生長溫度42℃。石蕊牛奶反應性,利用硝鹽。發(fā)酵三磷腺苷(ATP)的產(chǎn)量為2-3 g/L。存儲條件:2-8℃真空冷凍干燥法 純度:97%
Bacillus subtilis subsp. subtilis 枯草芽胞桿菌枯草亞種Bacillus subtilis subsp. subtilis凍干物安全等級:1模式菌株:no用于提取聚谷氨。LB,哥倫比亞血平板,好氧生長條件:30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Klebsiella rrigena 土生克雷伯氏菌Klebsiella rrigena分離基物:活性污泥凍干物安全等級:1模式菌株:no環(huán)境污處理NB生長條件:37℃,好氧,24h,陰性桿菌,純存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Salmonella saintpaul 圣堡羅沙門氏菌Salmonella saintpaul分離基物:進口凍火雞二節(jié)翼凍干物安全等級:2模式菌株:no研究、質(zhì)量控制營養(yǎng)肉汁瓊脂培養(yǎng)基::蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。121℃,15min。生長條件:36℃,好氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Salmonella agona 阿貢納沙門氏菌Salmonella agona分離基物:凍雞分割品凍干安全等級:2模式菌株:no研究、質(zhì)量控制。營養(yǎng)肉汁瓊脂培養(yǎng)基::蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。121℃,15min。生長條件:37℃,好氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:≥98%
EGF人表皮生長因子ELISA試劑盒實驗原理玫瑰紅鈉瓊脂角質(zhì)生長添加物腎上皮Nestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干蛋白)(抗原)
0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基角質(zhì)生長添加物(不含BPE)輸尿管上皮AR Alpha1( Alpha1-adrenergic receptor) α1腎上腺素能受體抗原
肉湯瓊脂培養(yǎng)基角質(zhì)生長添加物(不含動物成分)腎實質(zhì)Apelin36 脂肪炎癥因子Apelin36
普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(pH8.0-8.2)黑色素生長生長添加物腎系膜Nestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干蛋白)(抗原)
甘露瓊脂培養(yǎng)基黑色素生長添加物(不含TPA)膀胱上皮ASCL1/MASH1(Achaete-scute homolog 1) 神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗原
酪胨瓊脂成纖維生長添加物膀胱平滑肌ASPP1(apoptosis stimulating protein of P53 1) p53凋亡激蛋白1抗原
葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基成纖維生長添加物-2腎動脈內(nèi)皮ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡激蛋白2抗原
抗生素檢定培養(yǎng)基4號成纖維生長添加物(不含動物成分)腎動脈平滑肌neurofasciu-155 神經(jīng)束蛋白-155
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