ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Neisseria meningitidis 腦膜炎奈瑟菌Neisseria meningitidis分離基物:腦膜炎患者的脊髓液凍干管，斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):2Media sting蛋白胨10g，葡萄糖2g ，NaCl 5g， NaH2PO4 2.5g， 檸檬鈉)5g， 腦浸汁)800ml， 豬心浸液 200ml， 羊血10%， pH 7.2 [注]豬心和豬腦浸汁法：（1）新鮮豬心除去心頭和脂肪，攪碎100克加蒸餾至1000毫升；（2）新鮮豬腦除去血管，取200克加蒸餾至1000毫升；（3）50℃保溫1時(shí)，然后煮開15分鐘；（4）冷卻后用紗布過濾備用。傳代方法①凍干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂輪在凍干管壁劃兩圈，掰斷，用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解，平板涂布，活化培養(yǎng)。 ②斜面：試管口用75%酒精擦拭后，火焰灼燒，后用無菌接種鏟切塊，挑取接入平板或斜面，培養(yǎng)。生長條件:37℃，5%CO2存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏，凍干管10年以上，斜面1-3個(gè)月。 純度：>98.0%(T),升華提純

Streptomycesalbussubsp.albu 白色鏈霉菌白色亞種Streptomycesalbussubsp.albu安全等級(jí):1模式菌株:no158生長條件:28℃ 純度：>98.0%(T),升華提純

Lentzeasp LentzeaspLentzeasp分離基物:泥安全等級(jí):1模式菌株:no產(chǎn)抗生素。155生長條件:28℃ 純度：98%

Streptomycesclavuligerus 帶棒鏈霉菌Streptomycesclavuligerus分離基物:土壤安全等級(jí):1模式菌株:；基因組序列號(hào):ABJH00000000,CM000913,CM001015；提取物能夠通過環(huán)化作用將乙酰-L-半胱氨酰-D-纈氨轉(zhuǎn)變?yōu)槠S青霉素158生長條件:28℃ 純度：97%

Streptomycesscabiei StreptomycesscabieiStreptomycesscabiei分離基物:土壤安全等級(jí):1模式菌株:70生長條件:28℃ 純度：97%

Salmonella enrica subsp. enrica serovar Typhimurium 腸沙門氏菌腸亞種鼠傷寒血清型Salmonella enrica subsp. enrica serovar Typhimurium凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no研究、質(zhì)量控制。研究、質(zhì)量控制，《GB 4789.28 培養(yǎng)基:和試劑的質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)菌株。營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:37℃，好氧生長特性G-桿菌，精氨雙解酶陰性，賴氨脫羧酶、鳥氨脫羧酶陽性，氧化酶、尿素酶陰性，吲哚陰性，檸檬鹽實(shí)驗(yàn)陰性，不發(fā)酵蔗糖、肌醇，有動(dòng)力、產(chǎn)生H2S，兼性厭氧，適pH7.4~7.6。血清型：O 4，5，12 : H i : 1，2 。存儲(chǔ)條件:2-8℃。真空冷凍干燥法 純度：97%

Brevibacrium│flavum 黃短桿菌Brevibacrium│flavum斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no產(chǎn)蘇氨。CM0002生長條件:30℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：97%

Enrobacr│gergoviae 日溝維腸桿菌Enrobacr│gergoviae凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no研究CM0002生長條件:30℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：98 atom % D
IL-27人白介素27ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理RS瓊脂腦膜培養(yǎng)基卵巢癌組織源性原代GSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta)  糖原合酶激酶-3β（抗原）

AHM鑒別用培養(yǎng)基神經(jīng)培養(yǎng)基癌組織源性原代CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 )  G蛋白偶聯(lián)受體-2(抗原)

脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基少突膠質(zhì)前體培養(yǎng)基組織源性原代GSK-3 Beta, (Glycogen Synthase Kinase-3)  葡萄糖合成激酶-3（抗原）

蔗糖胰蛋白胨肉湯球狀少突培養(yǎng)基皮膚癌組織源性原代GTP-CH-1  三磷鳥苷環(huán)水解酶（抗原）

胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯（TSB-YE）少突膠質(zhì)培養(yǎng)基膠質(zhì)瘤組織源性原代H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2)  H5N1流感病M2型（抗原）

胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSA-YE）少突膠質(zhì)前體分化培養(yǎng)基髓母瘤組織源性原代HCV-Core  丙型肝炎病-C區(qū)（多肽）

李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)（MMA）雪旺培養(yǎng)基胃癌組織源性原代成纖維HCV-NS1  丙型肝炎病-NS1（抗原）

糖發(fā)酵肉湯基礎(chǔ)星形膠質(zhì)培養(yǎng)基肺微血管內(nèi)皮HCV-NS3  丙型肝炎病-NS3（抗原）
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)