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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞>> 中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系
產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號(hào) | FS-01X9735 |
產(chǎn)品屬于:
產(chǎn)品名稱:中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系
產(chǎn)品英文:CHO-K1
貨號(hào):FS-01X9735
細(xì)胞培養(yǎng)條件:F12K+10%FBS+1%P/S
生長(zhǎng)狀態(tài):貼壁生長(zhǎng)
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細(xì)胞STR鑒定:不提供STR鑒定報(bào)告
保存培養(yǎng)溫度(℃)37
運(yùn)輸溫度(℃):常溫
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞 在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄 采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒英文名稱:Human Soluble protein-100B,S-100B ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人β內(nèi)啡(β-EP)ELISA試劑盒英文名稱:human Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人原鈣黏1(PCDH1)ELISA試劑盒 英文名稱:Human protocadherin 1,PCDH1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒英文名稱:Human cutaneous T cell-attracting chemokine,CTACK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)ELISA試劑盒英文名稱:Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒 英文名稱:Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1,BLC-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人結(jié)締組織活化Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒 英文名稱:Human connective tissue-activating peptide Ⅲ,CTAPⅢ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin A,FcαRⅠ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E,FcεRⅡ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅡ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒 英文名稱:Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
人粒細(xì)胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒英文名稱:Human granulocyte chemotactic protein-2,GCP-2 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
人ω干擾(IFN-ω/IFNB)ELISA試劑盒英文名稱:Human Interferon ω,IFN-ω ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒 英文名稱:Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1,GlyCAM-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人干擾調(diào)節(jié)因子(IRF)ELISA試劑盒 英文名稱:Human interferon Regulatory Factor,IRF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人淋巴毒β(LTB)ELISA試劑盒 英文名稱:Human lymphotoxinβ,LTB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
人淋巴毒α(LTA)ELISA試劑盒 英文名稱:Human lymphotoxinα,LTA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 SNX27 SNX27蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
TRPV4/TRP12 瞬時(shí)受體電位蛋白12抗體規(guī)格: 0.2ml
TH/T-H glycoprotein TH糖蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
UHRF1 核蛋白95抗體規(guī)格: 0.2ml
PPP4C /蛋白磷4C抗體規(guī)格: 0.2ml
GNLY/NKG5 顆粒溶抗體規(guī)格: 0.2ml
Tuftsin 促吞噬抗體規(guī)格: 0.2ml
LHR/CGR 促黃體生成受體抗體規(guī)格: 0.1ml
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