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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96TKGF人角化細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
IL-2R人白介素2受體ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
PCDH1人原鈣黏素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
LTA人淋巴毒素αELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
ALDH人乙醛脫氫酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
FⅫ人凝血因子ⅫELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
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公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | KGF人角化細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human Keratinocyte Growth Factor, KGF Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63242 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Escherichia coli EPEC O 127 : K63 致瀉大腸埃希氏菌Escherichia coli EPEC O 127 : K63凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no質(zhì)量控制。NB生長條件:37℃,好存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度:95%
Microbacrium sp. 微桿菌屬M(fèi)icrobacrium sp.形態(tài)菌落形態(tài):菌落淺黃色,圓形,表面光滑、濕潤、稍凸,不透明。分離基物:諾尼根; 采集地:海南省三亞市凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noLB培養(yǎng)基::蛋白胨 10.0g,酵母 5.0g,NaCl 10.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。生長條件:30℃,好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Annulohypoxylon stygium 暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌(斜面)Annulohypoxylon stygium試管斜面安全等級(jí):1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25℃,好氧 純度:99%
Sphingomonaskoreensis SphingomonaskoreensisSphingomonaskoreensis分離基物:天然礦泉安全等級(jí):1模式菌株:no產(chǎn)纖維素酶、蛋白酶2生長條件:30℃ 純度:99%
Rhizobacrdauci RhizobacrdauciRhizobacrdauci分離基物:胡蘿卜安全等級(jí):1模式菌株:no180生長條件:30℃ 純度:97%
Sphingomonaspolyaromaticivorans SphingomonaspolyaromaticivoransSphingomonaspolyaromaticivorans安全等級(jí):1模式菌株:no33生長條件:30℃ 純度:97%
Citrobacrsedlakii 塞氏檸檬桿菌Citrobacrsedlakii分離基物:人的糞便,法國安全等級(jí):12生長條件:37℃ 純度:≥98%
Hyphomicrobiumzavarzinii HyphomicrobiumzavarziniiHyphomicrobiumzavarzinii安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法生長條件:30℃ 純度:98%
KGF人角化細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理3%性蛋白胨水(APW)少突膠質(zhì)前體培養(yǎng)基腦動(dòng)脈血管平滑肌GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 膠質(zhì)纖維性蛋白(抗原)
TCBS瓊脂球狀少突培養(yǎng)基腦靜脈血管內(nèi)皮AMPK Beta1 (AMP-activated Protein Kinase beta-1) 腺苷單磷活化蛋白激酶β1抗原
TCBS瓊脂角質(zhì)培養(yǎng)基腦靜脈血管平滑肌MMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1
多粘菌素B肉湯基礎(chǔ)(SCPB)角質(zhì)培養(yǎng)基(特定)腦膜MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原)
慶大霉素瓊脂成纖維培養(yǎng)基神經(jīng)元beta-Amyloid(1-16) peptide (rat, mouse) β淀樣肽(1-16)(大鼠,鼠)
瓊脂扁桃體上皮培養(yǎng)基神經(jīng)膠質(zhì)MMP-3(matrix metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor) 基質(zhì)金屬蛋白酶-3(抗原)
我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)口腔角質(zhì)培養(yǎng)基海馬神經(jīng)元MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7) 基質(zhì)金屬蛋白酶-7(抗原)
60g/L蛋白胨肉湯支氣管上皮培養(yǎng)基腦微血管內(nèi)皮MMP-14(Matrix metalloproteinase-14) 金屬基質(zhì)蛋白酶-14
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