EGFR激酶抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10384

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：EGFR激酶抑制劑

英文名稱：Erlotinib Hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|500mg

貨號：FS-X10384

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Erlotinib Hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|500mg

Erlotinib hydrochloride抑制純化的EGFR激酶，IC50為2nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：183319-69-9

別名：CP-358774;OSI-774;NSC 718781

純度：99.91%

分子量：429.9

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

鉆特省芽孢桿菌類固受體激活蛋白3抗體Human FAS(Tumor necrosisfactor receptor superfamily member 6) (GSH)

EC600*軸突導向因子1抗體Human FASL(Factor Related Apoptosis Ligand) 谷脫羧自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)

塔賓曲霉酪激B抗體Human FETUA(Fetuin A) 谷脫羧自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)

巴氏醋桿菌跨膜受體蛋白Notch-3抗體Human FGF19(Fibroblast growth factor 19)谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)

巴氏生孢八疊球菌中性粒彈性蛋白ELANE抗體Human FGF7(Fibroblast growth factor 7) 谷脫羧65(GAD65)

根瘤菌型肝炎病NS4B（65kDa）抗體Human FGF21(Fibroblast growth factor 21) 谷脫羧(GAD)

嗜冷桿菌神經(jīng)生長因子受體相關(guān)蛋白1抗體Human FGF9(Fibroblast growth factor 9) 谷脫氫(GDH/GLDH)

紫晶臘蘑死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體Human FGF4(Fibroblast growth factor 4) 谷受體(NMDAR)

淡紫擬青霉神經(jīng)絲蛋白抗體Human FN1(Fibronectin) 谷-半胱連接調(diào)節(jié)亞基(GCLM)

微管螺旋鏈霉菌磷化核因子抗體Human FCN1(Ficolin-1) 谷[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)

仰光鏈霉菌跨膜受體蛋白Notch-1抗體Human CHI3L1(Chitinase-3-like protein 1) 孤腓肽(OFQ/N)

鐮刀菌屬磷化核受體Rev-Erbα抗體Human DCN(Decorin) 鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)

鴨疫里氏桿菌雞新城疫病抗體Human CST3(Cystatin C) 鉤端螺旋體IgG(Leptospira)

還原型輔Ⅱ/磷酰腺二核抗體Human SLAM/CD150(Signaling Lymphocytic Activation Molecule) 鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)

塔里木類芽孢桿菌NIT2蛋白抗體Human c-MET(Hepatocyte growth factor receptor) 睪受體(TR)

鱈鹽球菌神經(jīng)分化因子1抗體Human C5a(Complement Component 5a) 睪(Testoterone)

犁頭霉Absidia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR大豆

腸炎沙門氏菌Salmonella│enteritidis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,選擇性的Met抑制劑黃豆黃

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR，可用于培養(yǎng)黃豆黃
EGFR激酶抑制劑桔林油脂酵母雙聯(lián)(2-甲基-2,4-戊二)酯脂聯(lián)受體1

淡紫擬青霉(現(xiàn)1) 2-(溴甲基)苯脂聯(lián)受體2

副豬嗜血桿丁基三化錫脂質(zhì)運載蛋白2

小麥粉水分、灰分 2,3-二氫-5-基-1-苯并呋喃直接膽紅

豇豆慢生根瘤 (1R,2R)-二[(2-甲氧基苯基)苯基磷]乙烷中介

香菇無水醋鋅中性粒彈性蛋白

大腸埃希氏 4-溴甲基-3-甲中性粒彈性蛋白2

玫瑰擬層孔 2,5-二甲基-2,5-二羥基-1,4-二噻烷中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白

黃赭色鏈霉 (R)-(-)-N,N-二甲基-1-(2-聯(lián)苯膦基）二茂鐵乙中性內(nèi)肽;腦啡肽

球孢白僵 1-(2--3-吡啶基)-乙酮腫瘤標志物；糖類抗原724

淡紫紫霉 N-Α-叔丁氧羰基-D-蘇腫瘤壞死因子α

葛氏沙雷氏縮水甘油腫瘤壞死因子β

產(chǎn)黃青霉 (S)-N,N-二甲基-1-[(R)-1',2-雙(二苯基膦基)二茂鐵基]乙腫瘤壞死因子γ

鴿痘病 (S)-(+)-N,N-二甲基-1-(2-聯(lián)苯膦基）二茂鐵乙腫瘤壞死因子受體1

霍氏分支桿 3-硝基肉桂腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)